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產(chǎn)品簡介：

RCA（Rolling Circle Amplification，滾環(huán)擴(kuò)增）是利用 phi29 DNA 聚合酶的超長合成能力，在一定條件下（如隨機(jī)引物、dNTP、Mg 離子存在時(shí)）能夠以線狀的超長基因組DNA 或環(huán)化后的短DNA 為模板進(jìn)行全基因組擴(kuò)增的技術(shù)。本產(chǎn)品是基于 RCA 技術(shù)，針對(duì)環(huán)狀 DNA 為模板專門開發(fā)的 RCA 試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，十分簡單方便，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.直接使用純化的環(huán)狀單鏈DNA 或環(huán)狀雙鏈 DNA 為模板。如果樣本為線狀 DNA， 需要預(yù)先對(duì)其進(jìn)行環(huán)化（本公司有單鏈 DNA 環(huán)化和雙鏈 DNA 環(huán)化試劑盒）。

3.RCA 屬于恒溫?cái)U(kuò)增，操作簡單，但如果要實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，需要熒光定量 PCR 儀器。如果沒有，也可以電泳檢測(cè)或PCR 檢測(cè)擴(kuò)增效果。

4.含熒光染料，可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) RCA 反應(yīng)過程，不需要跑電泳檢測(cè)，節(jié)約寶貴樣品（因?yàn)檫M(jìn)行 RCA 擴(kuò)增的樣品都非常珍貴）。

5.實(shí)時(shí)檢測(cè)使得反應(yīng)可以在平臺(tái)期后就可以結(jié)束，避免 phi29 DNA 聚合酶具有的強(qiáng) 3-5 外切酶活性降解已經(jīng)合成的 DNA。

6.phi29 DNA 聚合酶具有的強(qiáng) 3-5 外切酶活性，故擴(kuò)增具有高保真性。

7.可以將模板 DNA 在幾個(gè)小時(shí)到十幾小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增萬倍左右。

8.本產(chǎn)品足夠 50 次 10 ?L 體系的熒光染料實(shí)時(shí) RCA 反應(yīng)。

9.得到的 DNA 可以直接用于測(cè)序、酶切或 PCR 等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。染料法實(shí)時(shí) RCA 試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

規(guī)格及成分

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

環(huán)狀單鏈 DNA 模板或環(huán)狀雙鏈 DNA 模板、超純水。

使用方法：

1.按下表設(shè)置 10 uL 的環(huán)狀DNA RCA 反應(yīng)：

2.放熒光定量 PCR 儀器上，設(shè)置 30℃保溫 16 小時(shí)，每 10 分鐘設(shè)置成一個(gè)循環(huán)， 采集一次 SYBR 通道的熒光信號(hào)。由于是可以實(shí)時(shí)檢測(cè)反應(yīng)，所以反應(yīng)不一定要在設(shè)置時(shí)間到達(dá)后結(jié)束，可以在擴(kuò)增曲線進(jìn)入平臺(tái)期后（已經(jīng)沒有新的 DNA 合成）結(jié)束。因?yàn)閜hi29 DNA 聚合酶有很強(qiáng)的 3-5 外切酶活性，在聚合反應(yīng)停止后，它可能會(huì)進(jìn)入酶切模式，逐漸降解已經(jīng)合成的DNA。

3.65℃保溫 10 分鐘滅活酶。由于 phi29 DNA 聚合酶有很強(qiáng)的 3-5 外切酶活性， 因此必須滅活，否則它將逐漸降解已經(jīng)合成的DNA。

4.典型實(shí)驗(yàn)結(jié)果。有擴(kuò)增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線，無模板對(duì)照將沒有此標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線（見下圖）或擴(kuò)增曲線：

5.如果沒有熒光定量 PCR 儀器，則只能電泳檢測(cè)或PCR 檢測(cè)是否有擴(kuò)增。

6.擴(kuò)增所得 DNA 可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

選擇我們的染料法實(shí)時(shí) RCA 試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！