目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> 瓊脂糖凝膠 DNA 回收試劑盒(過柱法)
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50次 |
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貨號 | XY-D-1585 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Agarose Gel DNA Recovery Kit |
保存條件 | 常溫 | 有效期 | 12個月 |
產品簡介:
瓊脂糖凝膠 DNA 回收試劑盒(過柱法)用于從瓊脂糖凝膠中或DNA反應體系中高效快速回收DNA片段。
產品特點:
1.高效,回收效率-最-高可達90%(跟片段大小和膠濃度等因素有關)。
2.快速,整個過程只需要十余分鐘。
3.洗柱液不需要額外加乙醇。
4.兩用,既可用于瓊脂糖膠回收,也可以用于PCR或其他酶反應回收。
5.范圍廣,回收DNA的長度范圍為50 bp-40 Kb(但效率各不相同)。
6.最大吸附量為10ug。
7.回收的DNA可直接用于酶切、連接、PCR、測序等多種分子生物學實驗。
8.本試劑盒足夠純化50片含DNA的瓊脂糖凝膠條(每片膠條重量不超過250mg),足夠純化50次酶反應(包括PCR反應,每次體積不超過250uL)。
產品參數:
規格及成分
成分 | 規格 | 包裝 |
通用溶膠液 | 25ML | 30mL 本色瓶 |
吸附柱活化液 | 25ML | 30 mL 本色瓶 |
通用洗柱液 | 50ML | 60mL 本色瓶 |
離心吸附柱 | 50套 | 塑料袋 |
DNA 洗脫液(膠回收專用) | 10ML | 10mL 本色瓶 |
使用手冊 | 1份 | 無 |
保存和運輸
常溫運輸及保存,有效期為一年。由于通用溶膠液是高鹽溶液,因此在低溫時容易產生沉淀。如果產生沉淀,需要 60℃加熱溶解后才可以使用。
自備試劑
異丙醇。
使用方法:
1.用自備的干凈刀片切取含 DNA 片段的瓊脂糖凝膠(100 mg 左右,盡可能多地把多余的膠切除,否則會影響回收效率),放入一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中稱重,按重量比為 1:2 的比例加入通用溶膠液 (0.1 g 的瓊脂糖凝膠需要加入 0.2mL 的通用溶膠液)。如果瓊脂糖凝膠的濃度大于 2%,則需要按 1:3 的比例加入通用溶膠液。
2.50℃保溫 10 分鐘使膠完-全溶化,每隔 2-3 分鐘振蕩數次以促進瓊脂糖凝膠的溶化。如果片段長度在 300bp 以下,建議不要 50℃保溫,而是延長溶膠時間,以免 DNA 變性,影響回收率。
3.在等待期間,活化離心吸附柱。在離心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液,套上收集管后室溫放置 2 分鐘,然后 12,000 rpm 離心 2 分鐘,倒棄穿透液,再將吸附柱套上收集管后待用。活化后的離心吸附柱必須在當天使用。
4.在上柱前,在溶化的膠中加入相當于膠塊體積 1/2 的異丙醇(對 100mg 膠塊, 加 50uL),快速振蕩 10 秒混勻。
5.將溶液轉移到離心吸附柱中,套上收集管,靜置 3 分鐘。注意:靜置有助于DNA 與離心吸附柱的硅膠膜結合。本產品提供的離心吸附柱的最大上樣體積為 0.8mL,若溶膠液的總體積大于 0.8mL,一次加不完,可以分多次將溶液加入到吸附柱中。
6.12000-15000 g 室溫離心 1 分鐘,倒掉收集管中的穿透液。
7.加入 0.7mL 通用洗柱液于離心柱中,12000-15000 g 離心 1 分鐘,倒棄收集管中的廢液。如果回收的 DNA 用于鹽敏感實驗(如平末端連接或直接測序),建議加入通用洗柱液后靜置 2-5 分鐘再離心。
8.12000-15000 g 離心半分鐘以去除離心柱中的殘留液體。
9.將離心柱吸附置于一新的干凈的塑料離心管中,加入 50 uL DNA 洗脫液于離心吸附柱硅膠膜的中央。注意:如果回收的 DNA 用于測序,則可用重蒸水洗脫DNA。DNA 洗脫液可以也用 TE 替代,但用水或 TE 替代 DNA 洗脫液時,回收率可能稍有降低。
10. 靜置 3 分鐘后 12000-15000 g 離心 1 分鐘。
11.離心管底部所得溶液即為純化的 DNA 溶液,可立即用于后續實驗或者放-20℃ 長期保存。如果將所得 DNA 溶液再次加回到離心吸附柱中,重復洗脫過程, 將得到更多的 DNA。
12.用電泳方法或測 OD 方法確定回收所得 DNA 的濃度。如果 DNA 濃度低,也可能低于測 OD 的分光光度計的檢測極限之下,此種情況下就不能用此法。
注意事項:
1.通用洗柱液含有容易揮發物質,使用后一定要擰緊瓶蓋,密閉保存。
2.瓊脂糖凝膠體積的大小與回收率成反比關系,即體積越大,越不利于回收,一 次膠回收以使用 100 mg 瓊脂糖凝膠為宜。
3.如果在 5-10 分鐘內凝膠溶化不完-全,可以適當的延長水浴時間以使膠充分溶化,否則 DNA 包裹在瓊脂糖凝膠中,影響 DNA 的回收效率。
4.膠溶化后的液體轉移到離心柱后,可以延長靜置時間使 DNA 與膜充分結合, 提高回收效率。
5.洗脫 DNA 前的空甩很重要,其目的是去除膜上殘留酒精,否則殘留酒精會影響后續 DNA 反應。
6.增大 DNA 洗脫液使用量有利于回收,但要注意實際上樣量與最終回收體積的關系,以便于計算回收率。DNA 洗脫液可以用 TE 或水替代,但回收率稍有降低。
選擇我們的瓊脂糖凝膠 DNA 回收試劑盒(過柱法),就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!