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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒用于質(zhì)粒 DNA 小量制備與純化。基于改良后的堿變性法，用堿使基因組 DNA 和質(zhì)粒 DNA 均變性，再用酸中和，質(zhì)粒 DNA 可以快速復(fù)性，而基因組 DNA 不能快速復(fù)性，故可以通過離心去除。除去基因組 DNA 后的含質(zhì)粒DNA 的上清用離心吸附柱吸附質(zhì)粒 DNA，洗去雜質(zhì)，即可得到純化的質(zhì)粒 DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.快速、步驟少，整個(gè)操作在 30 分鐘左右完成。

2.不需要預(yù)平衡離心吸附柱。

3.通用洗柱液即開即用，不需要用戶額外加乙醇。

4.溶液 B 中有藍(lán)色染料，便于目測非常關(guān)鍵的堿變性和中和反應(yīng)兩步的溶液混勻狀況，保證實(shí)驗(yàn)效果。

5.產(chǎn)量高，一次可以處理 1-4mL 過夜培養(yǎng)的 G+菌液，每毫升過夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到 2-5μg/mL（取決于質(zhì)粒是高拷貝、中拷貝還是低拷貝）。

6.本產(chǎn)品足夠 50 次微量提取。

7.純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測序及 PCR 等。

8.質(zhì)粒DNA純化試劑盒（過柱法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸和保存，RNase A 溶液需要-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

無

使用方法：

1. 從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng) 12-16 小時(shí)（搖床轉(zhuǎn)速 200-300）。注意：建議使用 LB 培養(yǎng)基，營養(yǎng)更豐富的培養(yǎng)基會使菌體濃度過高，超過純化系統(tǒng)的處理能力而降低質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)量。

另外，延長培養(yǎng)時(shí)間會因細(xì)胞死亡、裂解而造成質(zhì)粒 DNA 濃度降低。

2.用 1.5mL 離心管收集 1-4mL 過夜培養(yǎng)飽和菌液，室溫 12,000rpm 離心 1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。

3.第一次使用本試劑盒時(shí)，先將本試劑盒提供的全部 RNase A 溶液加入到質(zhì)粒 DNA 純化溶液 A（簡稱溶液 A，下同）中，搖勻后再取用，未用完的溶液 A 放 4℃保存。

4.加入 250μL 溶液 A 到第 2 步得到的細(xì)菌沉淀中，用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意：細(xì)胞未充分懸浮會影響后續(xù)堿變性，可以使用漩渦振蕩器混勻或  使用槍頭吸頭吹打沉淀至完-全混勻。

5.加入 250μL 質(zhì)粒DNA 純化溶液 B（下面簡稱溶液 B，如果溶液 B 在低溫放置產(chǎn)生沉淀，須 37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和顛倒 4-6 次混勻，藍(lán)色將變得均勻并且溶液將變得粘稠。注意：千萬不要劇烈振蕩，否  則基因組 DNA 斷裂產(chǎn)生的片段非常容易污染質(zhì)粒 DNA。

6.冰上放置不超過 5 分鐘。注意：冰上放置不要超過 5 分鐘，否則質(zhì)粒 DNA 會有堿損傷。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進(jìn)入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的堿，降低其效率。如果溶液 B 顏色不是藍(lán)色，則表示變質(zhì)，應(yīng)該棄之不用并且跟廠家聯(lián)系。

7.加入 350μL 冰上預(yù)冷的質(zhì)粒DNA 純化溶液C（下面簡稱溶液 C），溫和反復(fù)顛倒 4-6 次，溶液將變成無色，將有白色絮狀沉淀產(chǎn)生。

8.冰上放置至少 5 分鐘讓質(zhì)粒 DNA 復(fù)性。不能短于 5 分鐘，一般 10 分鐘。

9.12,000rpm 離心 3 分鐘，小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大，部分絮狀物懸浮在上清液中屬正常現(xiàn)象，吸取上清時(shí)避開這  些懸浮物即可。如果此步的離心在 4℃進(jìn)行，可減輕沉淀物漂浮。

10.靜置 2 分鐘以讓質(zhì)粒 DNA 與離心吸附柱充分結(jié)合。

11.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，棄收集管中的廢液。

12.加入 500μL 的通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，棄收集管中廢液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要將蓋擰緊存放，  否則乙醇會揮發(fā)。

13.重復(fù)上步 1 次。

14.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響 DNA 的后續(xù)使用（如殘留乙醇使 DNA 溶液在電泳上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中）。

15.將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5mL 塑料離心管（自備）中，加入 30-100μ L65-80℃預(yù)熱的 DNA 洗脫液（基因組 DNA 專用），室溫放置 2 分鐘。

16.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA 溶液。

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