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產品簡介：

Bradford 法測定蛋白質濃度是最為常用的蛋白檢測方法之一，在酸性條件下，考馬斯亮藍（Coomassie G-250）染料能與蛋白質結合形成復合物，其最大吸光值也由 465nm 轉移到 595nm，通過顏色的強弱即可測定蛋白質濃度的高低。SDS-PAGE 電泳凝膠是蛋白電泳的常用凝膠系統，為適配該系統，本品在經典 Bradford 法基礎上做了改進，使得改良 Bradford 法與 SDS-PAGE 上樣液兼容。

產品特點：

1.與 SDS-PAGE 上樣液兼容。

2.快速，10-20 個樣品只需要 10 分鐘即可完成測定。

3.穩定，加樣混勻后 2 分鐘既可測定，1 小時內吸光度變化不超過 10%。

4.線性范圍在 50～1000µg/mL。

5.最小測量體積為 1-20µL，最-低測量蛋白量為 0.5µg。

6.即開即用，不需要單獨購買每個成分再配制。

7.有常規和微量兩種檢測模式。

8.不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。巰基乙醇的濃度可高達 1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達 5mM。

9.受略高濃度的表面活性劑影響，各種蛋白質與染料的結合效率可能有差異。

10.本產品至少可以按常規法測 200 次，按微量法測 1000 次。

11. 本產品只能用于科研。

產品參數：

產品規格

保存和運輸

常溫運輸及保存，有效期一年。

自備試劑

超純水、分光光度計、定性濾紙

使用方法：

一、制備溶液 A 工作液

1.將試劑盒提供的 Bradford 法蛋白定量溶液 A 與自備超純水按 1：4 比例充分混合即為溶液 A 工作液(例：4mL 溶液 A+16mL 超純水=20mL 溶液 A 工作液)。每次配制多少取決于檢測方法和測試體積，需要預先按下面手冊計算。

2.用本試劑盒提供的濾紙過濾溶液 A 工作液。過濾后的工作液室溫條件下可穩定使用 1-2 星期。注意：不同型號、規格的濾紙，具有不同的孔徑，導致可通過的分子各不相同。請使用本公司指-定提供的濾紙，否則會導致不同的測  定結果。

二、制備 BSA 標準品梯度稀釋液

3.測試開始之前，應首先制備 BSA 標準品梯度稀釋液。本試劑盒使用 BSA 作為標準品。用戶也可以使用自備的其他蛋白質濃度測定用標準品。每個濃度  具體需要多少體積取決于檢測方法和測試體積，需要預先按下面的手冊計  算。沒有用完的 BSA 標準品梯度稀釋液可以放-20℃待下次使用。

如果進行常規檢測，建議用溶解待測樣品的緩沖液將 BSA（2mg/mL）稀釋成下面的 8 個濃度：

0µg/mL、31.25µg/mL、62.5µg/mL、125µg/mL、250µg/mL、 500µg/mL、750µg/mL、1000µg/mL

如果進行微量檢測，建議用溶解待測樣品的緩沖液將 BSA（2mg/mL） 稀釋成下面的 6 個濃度：

0µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、7.5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL。

三、常規檢測流程

常規檢測法在蛋白濃度30-1000µg/mL 范圍內呈現R2=0.996 的直線線性

回歸，可精確定量蛋白濃度在此范圍內的蛋白樣品。

4.在標記的離心管中分別加入 N 個待測蛋白樣品和 8 個 BSA 梯度稀釋液，然后再在每個離心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。終體積多少取決于比色杯的體積。

如果用 3mL 比色杯檢測，則取 100µL 樣品+5mL 溶液 A 工作液； 如果用 1mL 比色杯檢測，則取 40µL 樣品+2mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，則取 20µL 樣品+1mL 溶液 A 工作液。

5.樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。

6.室溫放置 5 分鐘。

7.分光光度計檢測吸光度。波長設定=595nm。用 96 孔板測定時，應確保沒有氣泡，否則氣泡會絕對增加吸光度的讀數。

8.將待測樣品的測定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測定值繪制的標準曲線比較得到待測樣品的蛋白質濃度。

四、微量檢測流程

此方法在蛋白濃度 1～20µg/mL 范圍內呈現 R2=0.992 的直線線性回歸，可精確定量蛋白濃度在此范圍內的蛋白樣品。

9.在標記的離心管中分別加入 N 個待測蛋白樣品和 6 個 BSA 梯度稀釋液，然后再在每個離心管中按 4:1 的比例（注意：不是 1:50）加入溶液 A 工作液。終體積多少取決于比色杯的體積。

如果用 3mL 比色杯檢測，則取 4mL 樣品+1mL 溶液 A 工作液； 如果用 1mL 比色杯檢測，則取 2mL 樣品+0.5mL 溶液 A 工作液；

10.如果用平底透明 96 孔板，則取 400µL 樣品+100µL 溶液 A 工作液。樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。

11.室溫放置 5 分鐘。

12.分光光度計檢測吸光度。波長設定=595nm。用 96 孔板測定時，應確保沒有氣泡，否則氣泡會絕對增加吸光度的讀數。

13.將待測樣品的測定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測定值繪制的標準曲線比較得到待測樣品的蛋白質濃度。

選擇我們的改良Bradford法蛋白定量試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！