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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

堿變性法是最常見(jiàn)的質(zhì)粒 DNA 提取方法，其過(guò)程是首先菌體經(jīng)離心懸浮后，細(xì)胞被 SDS 和堿裂解，并且堿使基因組 DNA 和質(zhì)粒DNA 變性，隨后用酸中和，質(zhì)粒DNA 可以快速?gòu)?fù)性，而基因組 DNA 不能快速?gòu)?fù)性，故可以通過(guò)離心去除。如果用柱式法，則含質(zhì)粒 DNA 的上清用離心吸附柱吸附質(zhì)粒DNA，洗去雜質(zhì)，得到純化的質(zhì)粒 DNA。但此方法不適合特別大的質(zhì)粒。因此本公司推出沉淀法，用于純化柱式法不能回收的質(zhì)粒 DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.快速、步驟少，整個(gè)操作在 40 分鐘左右完成。

2.質(zhì)粒 DNA 純化溶液 B 中有藍(lán)色染料，便于目測(cè)非常關(guān)鍵的堿變性和中和反應(yīng)兩步的溶液混勻狀況，保證實(shí)驗(yàn)效果。

3.產(chǎn)量高，一次可以處理 1-5 mL 過(guò)夜培養(yǎng)的菌液，每毫升過(guò)夜培養(yǎng)的菌液可以提取到 2-5 ?g/mL（取決于質(zhì)粒是高拷貝、中拷貝還是低拷貝）。

4.本產(chǎn)品足夠 50 次微量提取。

5.純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR 等。

6.質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒（沉淀法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成分規(guī)格包裝

質(zhì)粒 DNA 純化溶液A13 mL15 mL 本色瓶

質(zhì)粒 DNA 純化溶液 B13 mL15 mL 棕色瓶

質(zhì)粒 DNA 純化溶液 C18 mL30 mL 本色瓶

RNase A 溶液，10 mg/mL0.6 mL1.5 mL 本色管

去蛋白溶液30 mL30 mL 棕玻瓶

質(zhì)粒沉淀液30 mL30 mL 本色瓶

DNA 洗脫液（基因組純化專用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份無(wú)

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸和保存，RNase A 溶液需要-20℃保存低溫運(yùn)輸，有效期一年。

自備試劑

75%乙醇。

使用方法：

從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng) 12-16 小時(shí)（搖床轉(zhuǎn)速 200-300）。注意：建議使用 LB 培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)更豐富的培養(yǎng)基會(huì)使菌體濃度過(guò)高，超過(guò)純化系統(tǒng)的處理能力而降低質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)量。另外，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間會(huì)因細(xì)胞死亡、裂解而造成質(zhì)粒 DNA 濃度降低。

2.用 1.5 mL 離心管收集 1-5 mL 過(guò)夜培養(yǎng)飽和菌液，室溫 12,000×g 離心 1 分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。

3.第一次使用本試劑盒時(shí)，先將本試劑盒提供的全部 RNase A 溶液加入到質(zhì)粒DNA 純化溶液 A（簡(jiǎn)稱溶液 A，下同）中，搖勻后再取用，未用完的溶液 A 放 4℃ 保存。

4.加入 250 ?L 溶液 A 到第 2 步得到的細(xì)菌沉淀中，用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意：細(xì)胞未充分懸浮會(huì)影響后續(xù)堿變性，可以使用漩渦振蕩器混勻或使用槍頭吸頭吹打沉淀至完-全混勻。

5.加入 250 ?L 質(zhì)粒 DNA 純化溶液 B（下面簡(jiǎn)稱溶液B，如果溶液 B 在低溫放置產(chǎn)生沉淀，須 37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和顛倒 4-6 次混勻， 藍(lán)色將變得均勻并且溶液將變得粘稠。注意：千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷?，否則基因組DNA 斷裂產(chǎn)生的片段非常容易污染質(zhì)粒 DNA。

6.冰上放置不超過(guò) 5 分鐘。注意：冰上放置不要超過(guò) 5 分鐘，否則質(zhì)粒 DNA 會(huì)有堿損傷。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會(huì)進(jìn)入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的堿，降低其效率。如果溶液 B 顏色不是藍(lán)色，則表示變質(zhì)，應(yīng)該棄之不用并且跟廠家聯(lián)系。

7.加入 350 ?L 冰上預(yù)冷的質(zhì)粒 DNA 純化溶液 C（下面簡(jiǎn)稱溶液C），溫和反復(fù)顛倒 4-6 次，溶液將變成無(wú)色，將有白色絮狀沉淀產(chǎn)生。

8.冰上放置至少 5 分鐘讓質(zhì)粒 DNA 復(fù)性。不能短于 5 分鐘，一般 10 分鐘。

9.12,000×g 離心 3 分鐘，小心將上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中。由于此時(shí)的溶液比重較大，部分絮狀物懸浮在上清液中屬正?，F(xiàn)象，吸取上清時(shí)避開(kāi)這些懸浮物即可。如果此步的離心在 4℃進(jìn)行，可減輕沉淀物漂浮。

10.加入 0.6 mL 去蛋白溶液，充分震蕩 2 分鐘后常溫 12，000×g 離心 2 分鐘， 取水相（無(wú)色）到新離心管中，不要取有顏色的部分。

11.加等體積的質(zhì)粒沉淀液，顛倒 30 秒混勻后室溫 12,000×g 離心 10 分鐘，質(zhì)粒

DNA 將形成沉淀，棄上清。

12.加入 1 mL 的自備 75%乙醇，室溫 12,000×g 離心 1 分鐘，棄上清。

13.室溫 12,000×g 離心 1 分鐘，取出殘留液體（約 50 ?L）。

14.室溫短暫放置半分鐘。

15.加入 DNA 洗脫液 50-100 ?L 重懸沉淀，即得質(zhì)粒 DNA 溶液，可以直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

選擇我們的質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒（沉淀法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！