目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 蛋白膠中量回收試劑盒(沉淀法)
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5次 |
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貨號 | XY-D-1643 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Midi Protein Gel Extraction Kit |
保存條件 | 常溫 | 有效期 | 12個(gè)月 |
產(chǎn)品簡介:
十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)不僅可用于檢測蛋 白質(zhì)的相對分子質(zhì)量,而且也是分離純化蛋白質(zhì)的重要工具之一,隨著蛋白質(zhì)技術(shù)的微量化,有必要從凝膠中回收蛋白質(zhì)以用于制備抗體、免疫印跡、氨基酸組分分析或末端序列測定等。本產(chǎn)品就是專門為此用途開發(fā)的中量蛋白膠回收法。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.簡單,不需要復(fù)雜而昂貴的儀器(如電洗脫儀)。
2.適用于變性 PAGE 膠(如 SDS-PAGE)和非變性 PAGE 膠。
3.每次可以處理 1 g 的 PAGE 膠(具體含多少蛋白質(zhì)取決于上樣的濃度)。
4.回收率一般在 50-90%之間(跟蛋白質(zhì)親水性、大小、洗脫時(shí)間相關(guān))。
5.跟后續(xù)的實(shí)驗(yàn)兼容,包括 2-D 電泳、質(zhì)譜測序、EMSA 或其它活性檢測實(shí)驗(yàn)等。
6.蛋白膠中量回收試劑盒(沉淀法)只能用于科研。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品規(guī)格
成份規(guī)格包裝
蛋白膠中量純化溶液 A5mL5 mL 本色瓶
蛋白膠中量純化溶液 B50 mL50 mL 本色瓶
20mL 塑料注射器5 只塑料袋
使用手冊1 份無
保存和運(yùn)輸
常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。
自備試劑
無
使用方法:
1.按常規(guī)方法進(jìn)行變性(SDS-PAGE)或非變性 PAGE 蛋白電泳。
2.切取含目的蛋白條帶的 PAGE 膠(盡可能地把多余的膠切除,否則會(huì)影響回收效率)。注意:PAGE 膠固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建議把樣品分多孔上樣,電泳后只切其中一個(gè)樣孔的膠條進(jìn)行固定和染色, 然后將此膠條放回到在整體膠中原來的位置,通過顯色膠條上的蛋白條帶找到在未染色膠上對應(yīng)區(qū)域,并切下此區(qū)域的膠進(jìn)行回收。
3.將切下的、重量不超過 1 克的膠塊轉(zhuǎn)移到 20 mL 塑料注射器中(不安裝針頭)。用塑料注射器推桿將膠塊從端口擠壓出去,使之變成細(xì)小的碎片, 用自備的 15mL 塑料離心管收集這些破碎的凝膠顆粒。也可用其他方法搗碎 PAGE 膠條,包括液氮研磨。膠條越碎,蛋白回收率越高。
4.加入 1 mL 蛋白膠中量純化溶液 A,4℃脫色搖床上搖晃洗脫至少 16 小時(shí)(過夜)。此期間最好將蛋白膠中量純化溶液 B 放在-20℃冰箱預(yù)冷待用。
5.10,000 g 離心 10 分鐘,轉(zhuǎn)移上清(含回收蛋白)到新的 10-15mL 的塑料離心管中,注意不要吸取 PAGE 膠碎片。
6.加入 5 倍體積的預(yù)冷的蛋白膠中量純化溶液 B,搖晃混勻。
7.-20℃放置至少 30 分鐘。
8.室溫 12,000 g(注意:一定要檢查使用的離心管是否能夠耐受此離心力, 如果不能建議將溶液分到 1.5 mL 的塑料離心管中再在臺式離心機(jī)上進(jìn)行離心處理)離心 20 分鐘,小心棄上清,不要吸走沉淀。
9.室溫充分晾干,得到的沉淀即為回收的蛋白質(zhì)?;厥盏牡鞍踪|(zhì)可溶解在跟
后續(xù)測試兼容的緩沖液中,直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)(2-D 電泳、質(zhì)譜測序等)。
選擇我們的蛋白膠中量回收試劑盒(沉淀法),就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航!
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