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產品簡介：

DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜試劑是基于毛細管轉膜法的 Southern 和Northern 印跡膜制備試劑，專門是從電泳得到的凝膠中制備用于 Southern 雜交和Northern 雜交的印跡膜。

產品特點：

1.即開即用，提供制備 5 次 Southern 或 Northern 轉膜（13×20cm）所需要的轉膜液。

2.快速：轉膜過程只需要 1 小時，整個過程（加上變性和中和等步驟）只需要 2.5 小時(對 DNA)或 1.5 小時（對 RNA）。

3.跟硝酸纖維素膜、帶電尼龍膜、中性尼龍膜和 PVDF 膜兼容。包括 Nytron、Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon 等。

4.硝酸纖維素膜適用于最小長度在 400bp 以上的靶分子，帶電尼龍膜適用于最小長度在 40bp 以上的靶分子。

5.使用優化的下向轉膜法，不但效率比上行轉膜法高 30%左右，而且條帶彌散度低、分辨率高。

6.可用瓊脂糖膠（包括脈沖電泳膠，DNA 電泳、RNA 甲醛膠電泳和 RNA 戊二醛電泳）和 DNA PAGE 膠。

7.DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜試劑盒只能用于科研。

產品參數：

成分規格包裝

DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜成分A660g1kg 干粉瓶

DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜溶液B100mL120mL 本色瓶

DNA-RNA兩用印跡膜轉膜中和液50mL×560mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

常溫運輸和保存,保存期限一年。

自備試劑

瓊脂糖電泳試劑、去離子水、印跡膜（硝酸纖維素膜或尼龍膜）

使用方法：

一：Southern 印跡膜的制備（DNA 轉膜，中性尼龍膜，硝酸纖維素膜）

1. 按常規方法進行電泳（包括脈沖電泳），本試劑盒不提供電泳所需試劑。如果進行常規的 Southern 雜交，建議使用 0.7%瓊脂糖進行電泳，分離酶切的基因組 DNA。電泳時最好加電泳分子量對照、酶切對照（先將標記的全長 lambda DNA 或探針質粒與樣品 DNA 的混合，再酶切）、陰性樣品（不含檢測片段的DNA 樣品）、雜交分子量對照（標記的 lambda/Hind III）等。電泳后和熒光

標尺并排拍照。

2.變性：首-次使用時需配制變性液 2.5L（在 3L 的干凈玻璃燒杯中加入約 2L 自備的去離子水，攪拌緩慢中加入 220g DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜成分 A 和100mL DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜溶液 B，溶解后定容到 2.5L 后即可用）， 將凝膠轉移到一個至少含 10 倍于膠體積的變性液中，脫色搖床上室溫下搖晃處理 60 分（如果使用帶正電尼龍膜，此步處理可以縮短到 30 分鐘）。未用完的變性液可放瓶中室溫保存。

3.配制轉膜液：如果使用帶正電的尼龍膜，則直接用上步配制的變性液轉膜，如果使用中性尼龍膜和硝酸纖維素膜，則需配置轉膜液（在 3L 的干凈玻璃燒杯中加入約 2L 自備的去離子水，緩慢攪拌中加入 440g DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜成分 A 和 2mL DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜溶液 B，溶解后定容到 2.5L 后即可用）。將凝膠轉移到至少 10 倍于凝膠體積的轉膜液中，脫色搖床上室溫下搖晃處理 15 分。

4.設置轉膜體系：測量凝膠的大小，然后借助尺子準確切出一張印跡膜，每邊比凝膠大 1mm，并切去一角，將印跡膜漂浮于去離子水上 20 分鐘確保全部濕潤， 再按下圖設置下行轉膜體系（比上行轉膜體系效率高 30%）。圖中 membrane即印跡膜，transfer buffer 即轉膜液，吸水濾紙厚度為 2-3cm，一般按每 cm2印跡膜需要 1 mL 轉膜液的比例準備轉膜液。對大的凝膠，可以同時使用兩張濾紙分別跟兩個容器的轉膜液連接以便使轉膜勻漿。

5.洗膠：凝膠轉移到一個含至少 10 倍于膠體積的轉膜液中，脫色搖床上室溫下搖晃處理 15 分。

6.轉膜：常溫轉膜 1 小時。結束后用鉛筆標記印跡膜的核酸結合面以免搞錯。注意：不要過夜轉膜，否則信號將降低 50%。

7.中和：將印跡膜在DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜中和液中處理10 分鐘，DNA-RNA

兩用印跡膜轉膜中和液的用量至少為 0.5mL/cm2 印跡膜。中和液容易長細菌，不建議長期放置。

8.檢測效果：可將凝膠放入 EB（0.5μg/mL）溶液中染色 30 分鐘后 UV 下觀察殘留核酸的量，反推轉膜效率。此步也可跳過。也可以另購印跡膜染液處理印跡膜，日光下觀察轉膜效果。

9.固定：將印跡膜夾在兩層濾紙中間 80℃干燥 15 分鐘以固定核酸（不需真空）， 干燥時間不需延長，否則雜交信號可能會降低。

10.此時印跡膜可直接用于后續的核酸雜交實驗或者在干燥狀態下保存待用（可放數月）。

二：Southern 印跡膜的制備（帶正電尼龍膜，DNA 轉膜）

11.電泳步驟同第 1 步。

12.變性：同第 2 步，只是時間縮短到 30 分鐘。

13.配制轉膜液：不需配制，直接用變性液轉膜。

14.其余處理同第 4 步到第 10 步。

三：Northern 印跡膜的制備（RNA 轉膜）

15.按常規方法進行電泳，本試劑盒不提供電泳所需試劑。本方法適用于甲醛變性膠和乙二醛變性膠，電泳后和熒光標尺并排拍照。

16.凝膠不需要變性和洗膠處理（也不能變性，否則 RNA 將會降解），電泳后直接進入轉膜步驟，完-全按第 6 到第 10 步處理。

選擇我們的DNA-RNA 兩用印跡膜轉膜試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！