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產品簡介：

Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Tricine-SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離多肽的主要方法，但是單獨配制各種溶液十分繁瑣，為此本公司開發了 Tricine-SDS-PAGE 電泳試劑盒。

產品特點：

1.一站式，提供除水和樣品以外的所有成分。

2.即開即用，用戶不需單獨準備各種成分，十分方便。

3.安全，免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。

4.電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。

5.本產品可配 30 塊 mini 膠

6.本試劑盒只能用于科研。

產品參數：

成分 規格包裝

丙烯酰胺/甲叉雙丙烯

酰胺干粉(19:1)60 g/3 g250 mL 棕色瓶

Tricine-SDS-PAGE

配膠液，3×250 mL250 mL 本色瓶

50%甘油25 mL30 mL 本色瓶

TEMED1.5 mL1.5 mL 棕色管

過硫酸銨1 g1.5 mL 本色管

Tricine-SDS-PAGE上樣緩沖液，2×1 mL×51.5 mL 本色管

Tricine-SDS-PAGE

陽極電泳液（干粉）10 L250 mL 本色瓶

Tricine-SDS-PAGE

陰極電泳液（干粉）10 L塑料熱封袋

使用手冊1 份無

運輸及保存

常溫運輸和保存（上樣液需要-20℃保存），保存期為一年。

自備試劑

Milli-Q 純水或同等級別的去離子水、水飽和的異丁醇。

使用方法：

本公司強烈推薦在分離多肽時使用由 4%濃縮膠、10%隔離膠和 16%分離膠從上到下組成的三層 Tricine-SDS-PAGE 膠，下面為配制該膠的流程。如果用戶不需要隔離膠或需要調整各種膠的濃度，請按比例修改。

1.  配制 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液（19：1）(丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液簡稱 AB 溶液，下同)：直接在裝有 60 克丙烯酰胺和 3 克甲叉雙丙烯酰胺的瓶中加入 140 mL 自備的去離子水，擰緊瓶蓋后 37℃水浴， 其間顛倒搖晃多次，直到干粉全部溶解，得到 30% AB 溶液（19：1），

該溶液最好 4℃避光保存，在一個月內用完。AB 溶液具有神經毒性，一定要戴手套操作。

2.配制 10%的 APS（過硫酸銨）：按每 0.1 克過硫酸銨干粉加 1 mL 去離子水的比例將去離子水加到裝有硫酸銨干粉的 1.5 mL EP 管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可在 4℃存放一周。過硫酸銨極其容易吸潮，沒用完的過硫酸銨一定要擰緊蓋子。如果吸潮，可用自備  的分析純過硫酸銨替代。

3.配制 30 mL 16%分離膠和 9 mL 10%隔離膠（足夠灌兩塊 0.75 mm× 14 cm×14 cm 膠）。

A)標記 2 個 50 mL 的三角瓶，按下表的用量加入各成分：

B)混勻后真空脫氣 10-15 分鐘。

C)灌分離膠：在分離膠瓶中加入 150 ?L 10%的 APS 溶液和 30 ?L TEMED 溶液，輕輕旋轉混勻。用吸管將分離膠溶液沿著一個隔條的邊緣加到玻璃板夾層中，直到溶液的高度距離玻璃上沿還有 5 cm。由于分離膠比重比隔離膠大，故可在其凝固前直接灌隔離膠。

D)灌隔離膠： 在隔離膠瓶中加入 75 ?L 10% 的 APS 溶液和 15 ?L TEMED 溶液，輕輕旋轉混勻。用吸管將積層膠溶液緩緩地沿著一側隔條邊緣加入到玻璃平板夾層中，直到溶液離玻璃板頂部約 3 cm 高為止。

E)蓋 1cm 高的自備水飽和的異丁醇使膠面跟氧氣隔絕（氧氣會抑制膠的凝固；此處水飽和的異丁醇可用水代替，但效果會差一些）。讓分離膠和隔離膠在室溫聚合 30-45 分鐘。

4.配制 9 mL 4%濃縮膠（足夠灌兩塊 0.75 mm×14 cm×14 cm 膠）。

F)在一個 50 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入各成分：

成份用量

30%AB 溶液（19：1）1.2 mL

Tricine-SDS-PAGE 配膠液，3×3.0 mL

補去離子水到 9 mL需加 4.8 mL

G)混勻后真空脫氣 10-15 min。

H)將 75 uL 新鮮配制的 10%的過硫酸銨溶液和 15 ?L TEMED 溶液加入到溶液中，輕輕旋轉混勻。用吸管將積層膠溶液緩緩地沿著一側隔條邊緣加入到玻璃平板夾層中，直到夾層中的溶液離玻璃板頂部約1cm 高為止。

I) 插入 0.75 mm 厚的塑料梳子，再補加濃縮膠溶液填滿梳子間的空隙。注意避免產生氣泡。讓濃縮膠在室溫聚合 30-45 分鐘。

5.小心拔出塑料梳子，在上層緩沖槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液(下稱陰極電泳液)，并用 1×陰極電泳液沖洗加樣孔。注：本產品提供 10 升的陰極電泳液干粉，將所有干粉溶解在 600-800 mL 去離子水中，最后定容到 1000 mL 即得 10×陰極電泳液，可以室溫放置，不需要滅菌，用時再用去離子水稀釋 10 倍成 1×陰極電泳液。

6.在電泳裝置的下層緩沖液槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE 陽極電泳液 (下稱陽極電泳液)。注：本產品提供 10 升的陽極電泳液干粉，將所有干粉溶解在 600-800 mL 去離子水中，用自備的濃鹽酸調 pH 到 8.9（25℃） 后定容到 1000 mL 即得 10×陽極電泳液，滅菌后可以 4℃長期放置。用時再用去離子水稀釋 10 倍成 1×陽極電泳液。

7.在密封的螺蓋微量離心管中，用 2×Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液按 1： 1 的比例稀釋蛋白樣品，于 100℃煮沸 3-5 分鐘。注意：如果樣品是蛋白沉淀物，則加入 50-100 ?L 新配的 1×Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液溶解；如果樣品是蛋白稀溶液，可先濃縮蛋白質。與 Tricine-SDS-PAGE上樣緩沖液混合后的樣品如未經 100℃加熱滅活蛋白酶，切勿放于室溫。

8.上樣。如果用考馬斯亮藍染色，對于成分復雜的蛋白質樣品，上樣量最好為 20 uL（含 25-50 ?g 總蛋白質）；對于只有一種或幾種蛋白質的樣品， 上樣量最好為 1-10 ?L。如果用銀染，上樣量可減少 10-100 倍。

9.電泳。先 30 V 恒壓電泳 1 h（對 0.75m

m×14cm×14cm 的膠而言），然后 150 V 恒壓電泳 4-5 h。注：本產品的 Tricine-SDS-PAGE 上樣液使用了考馬斯亮藍 G-250 作為指示劑，其泳動速度比最小的肽還快。

10.終止電泳，取出凝膠進行后續的實驗處理（最好用銀染染色，節約樣品）。  注意：考染或銀染時，基本步驟同蛋白 PAGE 膠染色，只是任何一步（尤其是固定步驟）的處理時間都不要超過 20 分鐘，否則多肽非常容易擴散出 PAGE 膠而降低檢測的靈敏度。

選擇我們的Tricine-SDS-PAGE 配膠液，3×，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！