9號培養基的檢測方法與應用！

一、背景

9號培養基用于多粘菌素等抗生素效價測定的底層培養基，成分(g/L)：胰酶消化酪蛋白胨17.0；大豆粉木瓜酶消化物3.0；氯化鈉5.0；磷酸氫二鉀2.5；葡萄糖2.5；Agar/瓊脂20.0；pH值7.2±0.1 25℃。

用法：稱取本品50.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅菌15分鐘，備用。

多粘菌素系由多粘芽胞桿菌（bacilluspolymyxa）產生的一組多肽類抗生素。多粘菌素和供藥用。常用其硫酸鹽，為白色結晶性粉末，易溶于水，有引濕性。在酸性溶液中穩定，其中性溶液在室溫放置一周不影響效價，堿性溶液不穩定。

多粘菌素抗菌譜及臨床應用與多粘菌素相似，對革蘭陰性桿菌，如大腸桿菌、綠膿桿菌、副大腸桿菌、肺炎克雷白桿菌、嗜酸桿菌、百日咳桿菌及痢疾桿菌等有抑制或殺菌作用。臨床上主要用于敏感菌引起的感染及綠膿桿菌引起的泌尿系統感染、以及眼、氣管、腦膜炎、敗血癥、燒傷感染以及皮膚粘膜感染等。

多粘菌素對綠膿桿菌、大腸桿菌、肺炎克雷白桿菌，以及嗜血桿菌、腸桿菌屬、沙門菌、志賀菌、百日咳桿菌、巴斯德菌和弧菌等革蘭陰性菌有抗菌作用。變形桿菌、奈瑟菌、沙雷菌、普魯威登菌、革蘭陽性菌和專性厭氧菌均對本類藥物不敏感。細菌對本品與多粘菌素之間有交叉耐藥性，但對本類藥物與他類抗菌藥物間則沒有交叉耐藥性發現。

二、應用

用于多重耐藥鮑曼不動桿菌對多粘菌素的耐藥機制研究：

測臨床分離鮑曼不動桿菌中攜帶的β-內酰胺酶基因及外排泵基因,體外誘導鮑曼不動桿菌對多粘菌素產生耐藥,以探討其對多粘菌素的耐藥機制。

三、方法

1、連續收集臨床分離的63株非重復多重耐藥鮑曼不動桿菌,采用微量肉湯稀釋法測定亞胺培南、美羅培南、頭孢他啶、頭孢吡肟、左氧氟沙星、環丙沙星、阿米卡星、多粘菌素及頭孢哌酮舒巴坦的抑菌濃度（MICs）。

2、采用腸桿菌科基因間重復序列-聚合酶鏈反應（ERIC-PCR）獲得63株鮑曼不動桿菌的指紋圖譜并進行同源性分析。

3、采用聚合酶鏈反應（PCR）檢測β-內酰胺酶基因TEM、AmpC、OXA-23、KPC、IMP、VIM,外排泵基因adeB、adeG、adeJ、adeR、adeS,兩組份調節系統基因pmrA、pmr B。

4、采用體外實驗對收集的菌株進行誘導耐藥,以獲得多粘菌素耐藥的鮑曼不動桿菌。

5、采用實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-qPCR）檢測誘導耐藥菌株及原始敏感菌株的外排泵基因adeB、adeJ、adeG及兩組份調節系統基因pmrA、pmr B的m RNA表達情況,分析其表達差異。

6、對負責脂質A生物合成的基因lpxA/lpxC/lpxD及兩組份調節系統基因pmr A、pmrB進行PCR擴增并將擴增產物測序,探討耐藥菌株是否發生特異性突變。

7、采用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）對誘導耐藥的菌株及原始敏感菌株進行檢測,分析其蛋白質差異。

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