人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)是一類(lèi)可用于疾病建模、藥物開(kāi)發(fā)和組織工程領(lǐng)域的多能誘導(dǎo)干細(xì)胞。與CRISPR-Cas9等功能強(qiáng)大的基因編輯技術(shù)結(jié)合后，可根據(jù)不同患者的特性進(jìn)行疾病相關(guān)遺傳變異的研究和識(shí)別。

      然而，培養(yǎng)hiPSCs的步驟較為繁瑣，細(xì)胞對(duì)異常的處理和操作非常敏感，任何操作的問(wèn)題都有可能導(dǎo)致細(xì)胞和遺傳毒性應(yīng)激的積累，進(jìn)而導(dǎo)致不良分化和多能性喪失。基因編輯建立單細(xì)胞衍生的hiPSC克隆過(guò)程中常用的技術(shù)往往過(guò)于復(fù)雜或粗暴，導(dǎo)致單細(xì)胞克隆效率低下。此外，它們?cè)诖_保衍生培養(yǎng)物單克隆性方面存在局限性。為此，英國(guó)iotaSciences公司推出了可實(shí)現(xiàn)100%單細(xì)胞分離的isoPick單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)，有效解決了培養(yǎng)hiPSCs單克隆過(guò)程中的困難。

      如右上圖所示，單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)isoPick采用納升級(jí)的網(wǎng)格式單細(xì)胞腔室技術(shù)（GRID技術(shù)），可實(shí)現(xiàn)高通量、高自動(dòng)化的單細(xì)胞可視化分選；確保分選所得的單細(xì)胞樣品中只有一個(gè)單細(xì)胞，結(jié)果可驗(yàn)證、可追蹤；分選過(guò)程非常溫和，能夠確保更高的單細(xì)胞存活率，達(dá)到更佳的克隆生長(zhǎng)效果。單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)isoPick可全自動(dòng)進(jìn)行單細(xì)胞的分選、拾取并轉(zhuǎn)移1.5 µl至200 µl的液體至PCR管或96孔板中。

      使用isoPick從GRIDs內(nèi)分選hiPSC單細(xì)胞置于Laminin-521,Vitronectin-N, Synthemax和iMatrix (Laminin-511)4種不同基質(zhì)且含有培養(yǎng)基的96孔板中。以第7-10天內(nèi)的時(shí)間計(jì)算得出的單細(xì)胞克隆效率可以發(fā)現(xiàn)，無(wú)論使用的包被基質(zhì)或hiPSC細(xì)胞系，平均克隆效率均>70%（上圖），明顯高于其他通常使用的方法(包括FACS)，表明isoPick對(duì)敏感單細(xì)胞的溫和處理，能夠確保細(xì)胞的高存活率和更好的克隆生長(zhǎng)效果。

      isoPick使用戶(hù)能夠以快速、高效、自動(dòng)化的方式從多樣、異質(zhì)的細(xì)胞群體中分離單個(gè)細(xì)胞。GRID腔室非常適合用于觀察和記錄單個(gè)細(xì)胞的分離過(guò)程。 用戶(hù)可將單個(gè)細(xì)胞分離并直接置入96孔板用于細(xì)胞克隆。相比傳統(tǒng)方法，這種方法用簡(jiǎn)單的線(xiàn)性工作流程，顯著提高了細(xì)胞分離與克隆效率，操作流程高度自動(dòng)化，可以將樣品無(wú)縫銜接單細(xì)胞組學(xué)的后續(xù)操作。

單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)：

● 全自動(dòng)化流程

● 操作非常簡(jiǎn)單 對(duì)細(xì)胞無(wú)損傷

● 結(jié)果可追蹤

● 分離效率高達(dá)100%

● 直接轉(zhuǎn)移到PCR管或96孔板

● 結(jié)構(gòu)緊湊，體積小巧

文獻(xiàn)舉例：

      單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)表于Cell、Advanced Science、Small Methods、Nature Communications 等期刊，如下摘引了近年三篇具有代表性的文獻(xiàn)和大家分享。

● Soitu C, Stovall‐Kurtz N, Deroy C, et al. Jet‐Printing Microfluidic Devices on Demand[J]. Advanced Science, 2020, 7(23): 2001854.

● Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell, 2021, 184(9): 2454-2470. e26.

● Deroy C, Nebuloni F, Cook P R, et al. Microfluidics on Standard Petri Dishes for Bioscientists[J]. Small Methods, 2021, 5(11): 2100724.

● Deroy C, Wheeler J H R, Rumianek A N, et al. Reconfigurable microfluidic circuits for isolating and retrieving cells of interest[J]. ACS Applied Materials & Interfaces, 2022, 14(22): 25209-25219.

● Oliveira N M, Wheeler J H R, Deroy C, et al. Suicidal chemotaxis in bacteria[J]. Nature Communications, 2022, 13(1): 7608.

樣機(jī)體驗(yàn)：

      為更好地服務(wù)中國(guó)科研工作者，Quantum Design 中國(guó)引進(jìn)了單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)-isoPick樣機(jī)，將為大家提供為專(zhuān)業(yè)的售前、銷(xiāo)售、售后技術(shù)支持，歡迎各位老師參觀試用！