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淋巴成纖維細胞培養方法

來源:上海莼試生物技術有限公司   2024年11月01日 15:47  

淋巴成纖維細胞培養方法

1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;

⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。

3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
4、細胞計數與活力評估:在進行細胞傳代、復蘇或凍存前,進行細胞計數與活力評估是至關重要的步驟。①取少量細胞懸液,與等體積的0.4%臺盼藍溶液混合,靜置2-3分鐘。②使用血細胞計數板,在顯微鏡下計數活細胞(未被臺盼藍染色的細胞)與死細胞(被臺盼藍染成藍色的細胞)。③計算細胞總數及活力百分比(活細胞數/總細胞數×100%)。確保細胞活力高于90%方可用于后續實驗,以保證實驗結果的準確性和可靠性。

5、培養環境優化:淋巴成纖維細胞的培養還需注意培養環境的細節優化。①維持培養箱內的溫度恒定在37℃,濕度飽和,并通入5% CO?以保持適宜的pH值。②定期更換培養基,一般為每2-3天一次,以去除代謝產物,補充營養物質。③使用經過滅菌處理的器材和試劑,減少污染風險。通過這些措施,可以進一步提升細胞的生長狀態,促進實驗的順利進行。


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