賽默飛7500實時熒光定量PCR儀詳細介紹

一、儀器概述

賽默飛7500實時熒光定量PCR儀（Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System）是一款應用廣泛的核酸定量分析平臺，基于熒光檢測技術對PCR擴增過程中的目標核酸進行實時監控與分析。該系統整合了精準的溫控模塊、靈敏的光學檢測系統以及成熟的數據分析軟件，適用于科研、臨床、食品安全、環境監測等多個領域。

該儀器采用5通道光學系統設計，支持多重PCR反應，可以同時檢測多種靶標，提高了實驗效率。在操作流程方面，設備配合用戶友好的軟件平臺，使整個實驗從設計、運行到數據分析更加系統化和直觀。

二、技術參數

1. 光學系統

• 5個獨立熒光通道，支持FAM、VIC、SYBR Green、ROX、TAMRA等多種常用熒光染料

• 高性能CCD檢測器，具備高靈敏度和信號線性響應

• 高效濾光片切換機制，確保信號采集的準確性與重復性

2. 溫控系統

• 基于Peltier元件的溫控模塊

• 升降溫速率約為1.6℃/秒

• 控溫精度為±0.25℃，保證擴增過程的穩定性

3. 樣本通量

• 標準96孔板格式，支持多種通用PCR耗材

• 單次運行可同時處理96個反應體系，適合中等通量的實驗需求

4. 反應體積

• 推薦反應體積：10–30 μL

• 支持多種體積設定，滿足不同試劑體系要求

5. 軟件功能

• Applied Biosystems SDS軟件支持定量分析、相對定量、基因表達分析、熔解曲線分析等

• 數據輸出格式多樣，便于與其他數據平臺對接

• 實驗過程實時監控，提供擴增曲線、標準曲線和Ct值信息

三、主要功能和應用場景

1. 絕對定量與相對定量分析

• 通過標準曲線建立靶基因的濃度與Ct值之間的關系，實現準確定量

• 在無標準品情況下，通過內參基因對比實現相對定量

2. 基因表達分析

• 應用于轉錄水平研究，可對不同條件下的基因表達水平變化進行監測

• 配合高質量引物設計和反轉錄體系，提高表達分析準確度

3. SNP分析和基因分型

• 利用TaqMan探針技術進行單核苷酸多態性檢測

• 可進行等位基因識別和樣本分型，適合遺傳研究和個體化醫學

4. 病原體檢測與載量分析

• 適用于臨床診斷實驗室中對病毒、細菌等病原體的快速檢測

• 能在早期感染階段提供檢測依據，有助于疾病預警與防控

5. 食品與環境檢測

• 檢測轉基因成分、致病菌殘留、過敏源等

• 在水質檢測、土壤微生物分析等環保項目中也有良好適應性

四、操作流程簡介

1. 樣品準備

• 提取DNA或RNA樣品并進行質量評估

• 進行反轉錄反應（如有需要），合成cDNA

2. 反應體系配制

• 配制PCR反應液，包括引物、探針、酶、緩沖液和模板

• 分裝入96孔板，封板后離心去除氣泡

3. 儀器設置與運行

• 打開SDS軟件，設定擴增程序和檢測通道

• 加載樣本并啟動反應程序

4. 數據分析

• 采集并分析擴增曲線，獲取Ct值和標準曲線

• 導出分析報告，進一步做統計或圖表處理

五、優勢特點

1. 操作界面直觀
   軟件操作簡潔，實驗流程明晰，有助于新手快速掌握使用技巧。

2. 結果可靠性高
   儀器具備良好的穩定性和重復性，適用于長期批量實驗。

3. 多通道檢測
   一次運行可完成多重靶標檢測，節約時間和樣本資源。

4. 維護便捷
   設備結構設計合理，日常維護工作量小，延長使用壽命。

六、維護與注意事項

1. 日常維護

• 定期擦拭光學部件，防止塵埃影響信號檢測

• 避免強光直射儀器，保持室內恒溫環境

• 檢查Peltier元件工作狀態，避免過載運行

2. 使用注意事項

• 正確選擇熒光染料和通道，避免信號交叉干擾

• 使用專用PCR耗材，確保熱傳導與熒光透明度

• 實驗前做好模板與反應體系的充分混勻，減少誤差

七、適用領域舉例

• 醫學研究：腫瘤標志物、病毒檢測、突變篩查

• 分子生物學：基因表達調控、功能基因篩選

• 農業科學：轉基因檢測、病害早期監控

• 法醫學：DNA指紋、樣本溯源分析

八、結語

賽默飛7500實時熒光定量PCR儀在多個科研和應用領域中展現出良好的性能表現，其穩定的檢測平臺和完善的數據處理功能為用戶提供了可靠的核酸檢測方案。盡管隨著技術的發展，更新型號不斷推出，但7500系統依然憑借其成熟的設計和廣泛的用戶基礎，在眾多實驗室中發揮著重要作用。