百歐博偉生物：植物組織培養技術，尤其是快速繁殖，并非只有專業人員和專業實驗室才能夠完成的。作為對多肉植物和組織培養有著濃厚興趣的愛好者，在充分利用家庭條件的基礎上，同樣可以制備出自己的試管苗來的。在我們進行多肉植物的栽培中認識到，一些比較名貴的園藝品種，比如：萬象、玉扇、壽、高紋鷹爪等十二卷屬品種，還是繽紛橄欖、何魯牽牛等塊莖類植物，甚至于星球屬、巖牡丹屬等等，這些植物的常規繁殖系數很低，他們都可以采用組織培養來解決其繁殖問題，并且可以得到相當數量的幼苗。對于奇想天外等種子萌發困難的植物，同樣可以借助組織培養來進行無菌播種。在進行組織培養過程中，不但可以對培養的植物有更深一層的認識，對常規的栽培有著相當大的意義。許多搞組織培養的專家，最初都不是專業學組培的，就是憑著興趣和探索精神取得輝煌成績的。關鍵是，愛好者有著濃厚的興趣，非凡的觀察力和細致入微的操作，這些都可以彌補非專業的缺陷，并且可以充分利用日常生活中的各種可利用資源，這些就足以讓愛好者在家庭環境下完成組織培養了。同時這也不僅僅滿足了自己的興趣，還可以有一定的經濟收益，甚至可以有所創新和發明。

一、如何解決場地和基本設備

進行組織培養，沒有一定的設備是無法開展的。正規實驗室的組織培養設備是昂貴的，不適合家庭消費，但如果能有途徑買到廉價的實驗室設備，那就在好不過了。如果沒有辦法搞到實驗室設備，就不妨動手自己制作一些簡單的設備。

1、無菌操作的主要設備——接種箱和壓力鍋：

接種箱：植物組織培養的主題操作需要在一個相對密閉的無菌環境中進行。那么說我們首先要創造一個密閉的環境，可以利用一些木料、塑料板、有機玻璃、鋁合金骨架等等廉價的材料，動手粘合一個小巧的接種箱。具體的參數可以找一本“食用菌栽培”的書籍，模仿種蘑菇的接種箱做一個即可。需要注意的是，組織培養的接種箱的密閉性要求比較高，盡量避免腐朽的木材和易生銹的材料，箱子的頂端按放兩盞燈：20w的紫外線燈和20w的日光燈。箱體的周邊盡量采用玻璃材料，因為這樣便于觀察，有時候接種箱還可以借用為培養箱，周邊采用玻璃材料更方便于觀察和培養。

高壓鍋：主要用來對培養基和其他材料的滅菌。在實驗室通常使用醫用高壓滅菌器，然而在家庭要充分利用廚房使用的高壓鍋，高壓鍋的壓力要低于滅菌器，但是適當延長滅菌時間，還是可以取得較好的效果的。比如：對培養基滅菌40分鐘就基本上可以達到滅菌效果（滅菌器是20分鐘）；無菌水采用間歇滅菌法，先用高壓鍋壓40分鐘，放置24小時，再壓20分鐘即可達到效果。

2、場地：

這個就因人而易了，總體的要求就是進行組織培養操作的地方要盡量無塵，減少空氣流動，有一定的陽光。比如書房、寫字間都可以用來進行無菌操作。

進行培養基的配制可以借用一下廚房，但所使用的器具必須和廚具分開。一般說，組織培養中的幾乎全部化學物質對人體是無害的，除了少數激素類物質和滅菌劑。對于有毒害的物質，需要認真保管，以免發生危險。

3、輔助設備：

主要指冰箱，它是用來儲存化學物質和培養基的。天平，可以采用感量在100克的托盤天平，甚至用中藥的藥衡都可以代替。培養架，這個就更簡單了，采用鋁合金-玻璃的培養箱既可以滿足要求，如果日光不足，可配合日光燈補光等。

4、化學試劑：

化學試劑是的，因為組織培養的核心就是培養基的成分，而并不是簡單的無菌操作。一些用量較大的化學物質是有必要買的，比如大量元素白砂糖、瓊脂等等。微量元素和有機復合物不需要購買，因為它們的用量很小，我們可以用蔬菜浸汁或者馬鈴薯浸汁來代替。激素是的，他們的稱量需要借助分析天平，但這是家庭條件所不允許的，如果有條件可以借助關系單位代替配成母液，每次取一些使用即可。辦法是到農資商店（賣農藥化肥的地方），它們一般出售農業用的激素，有的是用安瓿裝的，按照一定的比例加入到培養基當中即可。近幾年來，有些化學品公司開始生產植物組織培養基原粉，只需要稱取一定量加水即可，很方便。比如泛生化學品公司生產的ms原粉，只需要稱量40克，加1升水，用微波爐加熱5分鐘即可分裝，相當簡便。

消毒劑通常采用，如果不容易搞到，可以用漂白粉代替。調節酸堿度時，可以采用家庭常用的純堿和白醋。

5、培養容器和玻璃儀器：

組織培養的容器要求并不高，只要玻璃顏色為透明色即可（鈉玻璃不可以）。

我們可以到垃圾站去看看，撿回一些廢舊的果醬瓶就可以了。比較好用的是阿香婆辣醬瓶，我們實驗室也是采用的這種瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可，如果不好找到，可以采用微波爐專用的錫箔紙甚至方便面的袋子，折疊成雙層，用橡皮圈固定即可。

其它玻璃儀器，比如燒杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量儀器，如量筒和移液管到玻璃儀器商店購買，恐怕花不了20元錢就可以配置一套相當棒的組培玻璃儀器。

6、其它：

還有一些用品是必需的。比如精密ph試紙（5.4~7.0），需要買一本，大約花1.5元即可搞定；酒精燈也不需要買，用墨水瓶配上一個玻璃環，再加上一個棉花芯，最后用農夫山泉礦泉水的瓶蓋做燈冒，這樣的酒精燈很小巧，適合接種箱使用。刀子剪子鑷子是必需的，到花市的工具攤位上，花10元錢全部搞定，注意選比較小巧的工具。

關于用水，按理說應該使用蒸餾水，但是我們家庭飲用的純凈水比蒸餾水還要純，那么說借用一些飲用水就可以了。我們曾經采用康師傅純凈水進行動物細胞的培養，效果都是很不錯的，更何況于植物細胞培養了。

以上是組織培養的基本設備和試劑，主要突出了他們相關的替代品，因為作為組織培養中的快速繁殖，它的要求是相當低的。我們的家庭培養和工廠化是不同的，工廠化生產組培苗要追求高增殖率，所以它的要求就比較精細和標準。我們的家庭培養則不需要那么準確，只要達到培養成功的目的即可。當然，如果想提高增殖倍率和試管苗的品質，必須盡量貼近實驗室的用具和器材，代用品總是有一定的缺陷的。

二、進行組織培養前的準備

1、培養容器和玻璃儀器的準備：

進行培養基的配制首先要準備好培養瓶和配制使用的玻璃儀器。培養瓶一般使用各種果醬瓶，要先用洗潔精浸泡瓶子4~8小時，再用流水沖洗數次。其他的玻璃儀器同樣需要這樣清潔，直到玻璃壁上不掛水珠而是成為水膜為止。清洗完畢的玻璃容器要倒扣，空去瓶內的水。

清洗干凈的容器要注意防塵，盡量放置在玻璃柜中。更簡單的是用干凈的毛巾將容器蓋住。

移液管要用吸球來清洗，反復用蒸餾水吹吸直到潔凈為止，將移液管放置在一個長筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要準備幾只移液管，建議：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。

2、培養基的配制：

經典的組織培養用培養基是ms配方，其基本上劃分為：大量元素、微量元素、鐵鹽、有機復合物、植物激素、糖和支持物。這些成分的用量都在毫克級，用普通天平是難以稱量的，為了解決這個問題，我們可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的時候按一定比例加入即可。

下面我將一種ms培養基的母液配制方案公布如下：

大量元素：66.0克；

硝酸鉀76.0克；

無水氯化鈣13.3克；

七水硫酸鎂14.8克；

磷酸二氫鉀6.8克。

以上分別溶解后合并定容到1升，每配制1升標準ms培養基取25毫升。

鐵鹽：七水硫酸亞鐵5.56克；

乙二胺四乙酸二鈉（edtana）7.46克。

以上兩種分別加熱溶解，混合，定容到1升，調整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。

微量元素和有機復合物的用量過于微小，為了簡便我們可以用蔬菜提取液或者馬鈴薯提取液代替。通常我們習慣用100克菠菜加100ml的水煮沸10分鐘，過濾留濾液，每配制1升ms培養基加入20~50毫升提取液。同樣也可以使用帶皮馬鈴薯100克加200毫升水煮沸15分鐘，過濾留濾液，每升ms加入50~100毫升即可。

加入上述各組分后，每升ms培養基還需要加入白砂糖30克，瓊脂7克。這里要說明的是，糖和瓊脂都是可變的量，要根據需要調整。另外制作果凍用的卡拉膠也可以代替瓊脂，透明度更好。

上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波爐加熱，直到瓊脂全部溶解為止。此時加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，這樣每取1毫升，換算到培養基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是為了抵消分裝和消毒中的損耗。最后用酸堿調整ph到5.8~6.0。

3、使用ms原粉配制培養基：

目前國內的一些化學品公司開發了簡便的ms培養基原粉，大大簡便了培養基的配制，根據不同公司的說明選擇培養基的種類。下面就以泛生化學品公司的ms原粉為例：泛生化學品公司生產的ms培養基原粉，包括了大量元素、微量元素、鐵鹽、有機復合物、糖和支持物，他們的支持物是一種人工合成的半乳糖硫酸脂——polygal，這種物質作為支持物雖然提高了成本，但是無論是透明度還是強度都優于瓊脂，更重要的是ploygal對組織的褐變有一定的抑制作用，對初學者尤為重要。一般稱取ms原粉40克，加水800毫升，微波爐加熱溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），調整ph值到5.8~6.0。

值得指出的是polygal還有一個特點，他對ph和滅菌時間的敏感性很強，如果培養基配制和滅菌出現問題，他會變色來提醒實驗者培養基出現問題，這個也對初學者有一定的幫助。泛生公司也提供純品polygal 供研究使用。

泛生公司的ms原粉價格大約是50元1000克，能制備20升ms培養基。這對于家庭做組培的愛好者來說，花50元錢可以使用一兩年。

4、分裝：

將配制好的培養基分裝在培養容器中，注意要趁熱分裝，因為瓊脂在40度以下就會凝固。每個培養瓶裝培養基大約是瓶容積的1/6~1/5，注意不要將培養基掛在瓶的外壁，這樣容易造成污染。分裝后用聚丙烯薄膜或著方便面的袋子封口，用膠圈固定（膠圈盡量選擇自行車的內胎，這種膠圈比較耐熱）。

5、滅菌：

采用家庭壓力鍋消毒，建議到醫療器械用品商店買一些“滅菌效果試紙”，它們可以指示滅菌效果，當滅菌達到效果時會變色。把試紙和培養基同時放入鍋內，加熱到有大量蒸汽冒出，再加上壓力伐，維持小火30~40分鐘。

滅菌完畢后自然冷卻，將培養基取出，放在陰涼無塵處備用。

6、接種箱的準備：

新制作的接種箱必須要清潔干凈，盡量做到。每次使用前2小時，將操作所需要的全部物品放入接種箱，再用一個小燒杯加入3~5克高錳酸鉀放入接種箱內，在箱內向燒杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大約幾秒鐘后會看到甲醛蒸汽出現，這樣可以對接種箱內的所有物品進行初次消毒；同時打開紫外線燈照射。紫外線燈是高電壓穿激汞蒸汽產生的，紫外線進行第二道滅菌，在紫外線照射大約15分鐘后，會激發氧氣形成臭氧，臭氧作為第三道滅菌防線，這樣經過三次滅菌，接種箱基本上可以達到無菌標準。

在操作前15分鐘內，向剛才蒸發甲醛用的燒杯中倒入5毫升濃氨水，因為甲醛對人體有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一種叫做“六亞甲基四胺”的固體物質，從而中和了甲醛的刺激性蒸汽。這個時候紫外燈不要關掉，要繼續照射，直到操作前5分鐘關閉，維持黑暗5分鐘，然后再打開日光燈進行操作。維持5分鐘黑暗的原因是，紫外光對微生物的殺滅是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚體，但是微生物具有一種光復活蛋白，可以在有可見光的環境下還原胸腺四聚體，而使微生物復活，這個作用叫做“光復活作用”，所以在關掉紫外燈后必須維持黑暗幾分鐘，避免光復活作用的出現。

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