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神經干細胞利用微重力三維細胞培養系統培養方案

來源:北京科譽興業科技發展有限公司   2025年03月27日 10:48  

1. 前期準備

 

- 實驗材料:獲取神經干細胞(如從胚胎腦組織分離)、微重力模擬裝置、神經干細胞專用培養基(含 B27 添加劑、EGFbFGF DMEM/F12 培養基)、多聚賴氨酸包被的培養容器、無菌器械等。

 

- 設備準備:與腫瘤細胞培養類似,調試賽奧維度CellSpace-3D微重力三維細胞培養系統,確保溫度、氣體環境適宜。

 

2. 細胞分離與接種

 

- 細胞分離:解剖獲取胚胎腦組織,在無菌條件下剪碎,用胰蛋白酶消化后,通過機械吹打制成單細胞懸液,過濾去除組織塊,離心收集細胞。

 

- 接種:將神經干細胞以 2 - 3×10? /mL 的密度接種到微重力培養裝置中,因神經干細胞易貼壁,包被多聚賴氨酸可促進貼壁。

 

3. 培養過程

 

- 2 - 3 天添加適量新鮮培養基,維持營養成分。觀察細胞神經球形成情況,神經球直徑達到一定大小時,可進行傳代培養。

 

- 采用免疫熒光技術檢測神經干細胞標志物(如 Nestin)的表達,以鑒定細胞特性。

 

4. 誘導分化:培養一定時間后,可更換為含血清的分化培養基,在微重力環境下誘導神經干細胞向神經元、星形膠質細胞等分化,通過免疫細胞化學檢測相應細胞標志物(如 β - Tubulin III 用于神經元,GFAP 用于星形膠質細胞)評估分化效果。


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