研究背景

細(xì)胞能量代謝研究對于理解細(xì)胞代謝途徑和藥物作用機(jī)制具有重要意義。能量代謝物（如ATP、ADP等）在液相質(zhì)譜分析中易與金屬離子絡(luò)合，導(dǎo)致分析靈敏度降低。

實(shí)驗方法

1. 液相色譜條件：

   - 流動相：A相為90%水（含20 mM乙酸銨和5 μM亞甲基二膦酸），B相為90%乙腈（含20 mM乙酸銨和5 μM亞甲基二膦酸）。

   - 流速：0.3 mL/min。

   - 柱溫：40℃。

   - 梯度洗脫：通過表1所示的時間和流動相比例進(jìn)行梯度洗脫。

2. 質(zhì)譜條件：

   - 數(shù)據(jù)采集方法：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

   - 離子源：電噴霧離子源（ESI），正負(fù)模式切換。

實(shí)驗結(jié)果

1. 峰型和靈敏度：

   - 通過優(yōu)化流動相條件（加入亞甲基二膦酸），顯著改善了能量代謝物的峰型，提高了檢測靈敏度。

   - 正離子模式和負(fù)離子模式下目標(biāo)化合物的提取離子流圖分別見圖1和圖2。

2. 數(shù)據(jù)分析：

   - 對12個細(xì)胞樣品（6個給藥組和6個對照組）進(jìn)行靶向分析。

   - 通過統(tǒng)計分析（p-value < 0.01和VIP > 1），篩選出92種顯著變化的代謝物。

   - 熱圖（圖3）顯示，給藥組和對照組之間存在顯著差異。在top 25化合物中，給藥組中腺苷、鳥苷等14種物質(zhì)含量升高，而脫氧鳥苷三磷酸、甘氨酸等11種物質(zhì)含量降低。

方法特點(diǎn)及優(yōu)勢

1. 檢測能力：

   - 在SCIEX Triple Quad™ 6500+系統(tǒng)上建立了330種能量代謝物的檢測方法，適用于高通量靶向分析。

2. 性能優(yōu)勢：

   - 該系統(tǒng)具有高靈敏度和強(qiáng)抗基質(zhì)干擾能力。

   - 簡化了樣品前處理流程，回收率和儀器重復(fù)性良好。

   - 本土化產(chǎn)品性能與進(jìn)口產(chǎn)品相當(dāng)，為能量代謝物的差異分析提供了快速可靠的方法。

結(jié)論

本文建立的檢測方法能夠高效準(zhǔn)確地分析細(xì)胞能量代謝物的變化，為藥物作用機(jī)制研究提供了有力工具。