凝集素是一類能與糖結(jié)合的蛋白質(zhì)或糖蛋白。部分凝集素在攝入較多時可能會對人體產(chǎn)生不良影響。測定食用菌中的凝集素含量能夠評估其食用安全性,避免因食用含有過量凝集素的食用菌而危害健康。
根據(jù)GB/T 44734-2024,測定食用菌中凝集素的測定方法是高效液相色譜法,原理是:試樣中凝集素經(jīng)磷酸鹽緩沖液提取,利用溶解度、分子質(zhì)量差異,通過硫酸銨沉淀、超濾濃縮后,高效液相色譜法測定,以保留時間定性,外標(biāo)法定量。
實驗涉及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
食用菌中凝集素標(biāo)準(zhǔn)溶液溶液:準(zhǔn)確稱取10mg食用菌中凝集素,于試管中用水溶解,并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中定容至刻度線。該標(biāo)準(zhǔn)溶液中食用菌中凝集素的質(zhì)量濃度為1mg/mL,-20℃冰箱避光保存,有效期一周。
用5mL規(guī)格的Miragen電子移液器,設(shè)置5個體積為100、200、300、500、1000μL(程序可存儲和調(diào)用),將5個體積的食用菌中凝集素標(biāo)準(zhǔn)溶液溶液分別加入至5mL容量瓶中;將以上5個容量瓶中的食用菌中凝集素標(biāo)準(zhǔn)溶液用水稀釋、定容至刻度線,搖勻,得到食用菌中凝集素系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,質(zhì)量濃度分別為20、40、60、100、200μg/mL,按參考色譜條件測定,食用菌中凝集素典型高效液相色譜圖見下圖,以食用菌中凝集素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計算線性回歸方程。
實驗室移取小體積(幾微升到10毫升)的液體,一般采用移液器。Miragen電動移液器,數(shù)值靠設(shè)定或選定,電機(jī)控制活塞運(yùn)動,吸液和排液也更加穩(wěn)定,還有步驟少、調(diào)數(shù)快、模式多等諸多優(yōu)勢。
Miragen電動移液器還可給電機(jī)多段信號,從而達(dá)到吸液和排液分次數(shù)且各段體積可調(diào),可實現(xiàn)單吸多排、多吸單排等效果,程序還可存儲和調(diào)用,更加可靠、便捷。
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