乙醇在人體內參與多種代謝途徑。攝入后,乙醇主要在肝臟通過氧化代謝進行代謝,涉及乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶,將乙醇轉化為有毒的乙醛,再進一步轉化為乙酸,最終生成二氧化碳和水。乙醇代謝影響能量平衡和營養物質的利用。乙醇的代謝優先于其他宏量營養素,導致過量的碳水化合物和脂肪儲存。長期飲酒會破壞代謝途徑,影響肝臟功能、脂質代謝和血糖調節。AkrivisBio的乙醇檢測試劑盒提供了一種簡單、靈敏的乙醇測量方法,適用于多種樣本。在檢測中,乙醇氧化酶將乙醇氧化生成過氧化氫(H?O?),隨后用于形成具有強烈顏色和熒光的熒光素,檢測靈敏度可達0.05納摩爾。
艾美捷乙醇測定試劑盒:
貨號:MA-0131
規格:100孔
樣本類型:血清、血漿、細胞裂解液、組織提取液、細胞培養上清液、尿液
適用物種:通用(適用于所有物種)
檢測方法:比色法(檢測波長570納米)或熒光法(激發/發射波長=535/580納米)
檢測類型:定量
應用:基于微孔板的比色法/熒光法檢測,用于測量多種樣本中的乙醇濃度。
靈敏度:0.05納摩爾
儲存條件:-20°C
運輸條件:凝膠冷藏包
乙醇測定試劑盒檢測組分:
-檢測緩沖液:25毫升,貨號WMMA-0131A
-ADHP溶液:200微升,紅色,貨號MA-0131B
-乙醇氧化酶/過氧化物酶:凍干粉,綠色,貨號MA-0131C
-乙醇標準品(40mM):0.2毫升,黃色,貨號MA-0131D
乙醇測定試劑盒檢測原理:
1.乙醇被乙醇氧化酶氧化,生成乙醛和過氧化氫。
2.過氧化物酶利用過氧化氫將ADHP氧化為熒光素,產生顏色和熒光。
注意:空氣中的乙醇會對檢測性能產生不利影響。檢測必須在w全無乙醇的環境中進行。
儲存和處理:在使用前將試劑盒儲存于-20°C。使用前將檢測組分恢復至室溫。打開試劑瓶前請短暫離心。
-檢測緩沖液:直接使用,儲存于4°C。不使用時請緊密封閉。
-ADHP溶液:直接使用,儲存于-20°C。
-乙醇氧化酶/過氧化物酶:向酶混合物中加入220微升檢測緩沖液。儲存于4°C。
-乙醇標準品:直接使用,儲存于-20°C。僅在取樣時打開,不使用時請緊密封閉。
檢測步驟:
1.標準曲線:
-a.比色法檢測:將10微升乙醇標準品轉移至990微升檢測緩沖液中,混合均勻,配制成0.4mM的工作溶液。將0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分別轉移至96孔板的多個孔中,用檢測緩沖液將所有孔的體積調整至50微升,得到每孔0、2、4、6、8、10納摩爾的乙醇標準系列。
-b.熒光法檢測:按照比色法檢測稀釋標準品,然后將10微升轉移至190微升檢測緩沖液中,配制成20微摩爾的工作溶液。將0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分別轉移至96孔板的多個孔中,用檢測緩沖液將所有孔的體積調整至50微升,得到每孔0、100、200、300、400、500皮摩爾的乙醇標準系列。
2.樣本準備:所有樣本讀數必須在標準曲線范圍內,并應相應準備。液體樣本可以直接使用或用檢測緩沖液稀釋后測試。血清應稀釋約10-100倍。將所有孔的體積調整至50微升。
-注意:純乙醇約為17M。酒精濃度為3%(約0.5M)至14%(2.4M)的酒j飲料需要稀釋1000倍或更多。
3.啟動反應:每個反應需要50微升反應混合液。
4.測量:在570納米(比色法檢測)或激發波長535納米/發射波長580納米處監測反應,室溫下持續60分鐘。
5.典型結果:
6.計算:
-從所有其他標準品和樣本中減去零乙醇背景值(背景信號超過約0.1OD表明空氣中存在微量乙醇。背景讀數可能較大,必須從樣本讀數中減去。可以容忍高達0.5OD的背景)。繪制標準曲線。確定標準曲線的斜率。將背景校正后的樣本值除以標準曲線的斜率,以獲得孔中的乙醇納摩爾數。將孔中的乙醇納摩爾數除以加入孔中的樣本體積(微升)=樣本中的乙醇納摩爾數/微升。如果樣本來自組織或細胞,將樣本中的乙醇納摩爾數/微升乘以樣本總體積,再除以用于制備樣本的組織毫克數或細胞數量=每毫克組織(或每細胞數量等)中的乙醇納摩爾數。
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