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島津液相色譜柱的使用方法涉及多個步驟

來源:廣州譜分儀器有限公司   2025年04月09日 17:50  
  島津液相色譜柱是一款新開發的高純硅膠液相色譜柱。具有高分離度、高惰性、高柱效、耐污染等特點,該系列色譜柱可在較寬pH范圍、較高比例水相流動相條件下穩定使用。廣泛適用于食品、藥品、環境等多個領域的分析檢測項目。其通過優化的表面鍵合密度,在保證良好分離效果的前提下,可提供適中的疏水作用力,化合物洗脫更快,分析效率更高。在與島津高分離度系列VP-ODS和GIS C18的對比實驗中可以看到,使用SHIMSEN Ankylo C18色譜柱可獲得相當的分離效果,同時出峰更迅速。柱效更高,峰形也更尖銳。
  島津液相色譜柱的使用方法涉及多個步驟,以下是詳細的操作指南:
  一、前期準備
  選擇合適的色譜柱
  根據樣品的化學性質選擇色譜柱類型。如分析極性化合物可選擇反相色譜柱(如C18柱),非極性化合物可選擇正相色譜柱(如硅膠柱)。
  考慮色譜柱的柱長、內徑和粒度等參數。柱長影響分離度,內徑決定流速和進樣量,粒度與柱效有關。一般較長、較細粒度的色譜柱有更高的分離能力,但壓力也相對較大。
  配置流動相
  精確稱取或量取所需溶劑,按比例混合。例如,對于反相色譜常用的甲醇-水或乙腈-水體系,要注意溶劑的純度和混合均勻性。
  對流動相進行過濾和超聲脫氣。使用0.45μm或更小孔徑的濾膜過濾,以去除雜質;超聲脫氣時間一般為15-30分鐘,避免流動相中存在氣泡影響泵的工作和檢測準確性。
  準備樣品
  樣品要溶解在合適的溶劑中,且溶劑要與流動相互溶,避免產生沉淀或導致色譜柱堵塞。
  樣品溶液的濃度要適中,一般根據檢測器的靈敏度和色譜柱的負載能力來確定,通常在mg/mL到μg/mL級別。
  樣品溶液同樣需要過濾,以防止固體顆粒進入色譜柱。
  二、裝柱與連接
  安裝色譜柱
  將色譜柱安裝在液相色譜儀的柱溫箱內指d位置,確保色譜柱兩端的接頭與儀器的管路連接緊密,防止漏液。
  注意色譜柱的方向,一般入口端標記為“In”,出口端標記為“Out”,不要接反。
  連接管路
  按照儀器說明書的要求,將流動相的管路連接到色譜柱的入口端,將色譜柱的出口端連接到檢測器。
  檢查所有連接是否牢固,可適當擰緊接頭,但不要過度用力以免損壞色譜柱或管路。
  三、系統平衡
  沖洗色譜柱
  用較低流速(一般0.1-0.5mL/min)的流動相沖洗色譜柱,沖洗體積約為色譜柱體積的10-20倍。目的是去除色譜柱內可能存在的雜質和保存液。
  觀察柱壓和流出液的情況,確保柱壓穩定,流出液無異常顏色或雜質。
  平衡色譜柱
  逐漸增加流動相流速到設定的分析流速,繼續沖洗色譜柱,直到基線穩定。這個過程可以使色譜柱內的固定相達到充分的平衡狀態,保證分離效果的重復性。
  平衡時間因色譜柱類型和流動相組成而異,一般需要30分鐘到數小時不等。
  四、進樣分析
  設置進樣參數
  根據樣品性質和分析要求,在儀器控制軟件上設置進樣量、進樣速度等參數。進樣量要合適,過大會超過色譜柱負載能力,導致峰形展寬;過小則可能檢測不到足夠的信號。
  選擇合適的進樣方式,如手動進樣或自動進樣。手動進樣時要注意進樣針的操作規范,避免帶入空氣或污染樣品。
  啟動分析
  點擊儀器控制軟件上的“開始”按鈕,啟動泵輸送流動相,同時進樣閥切換將樣品注入色譜柱。
  觀察基線和峰形變化,記錄色譜圖。分析過程中要保持流動相流速、柱溫等條件的穩定。
  五、清洗與維護
  清洗色譜柱
  每次分析完成后,用適當的溶劑沖洗色譜柱。對于反相色譜柱,可先用強溶劑(如甲醇或乙腈)沖洗,然后換用弱溶劑(如水);對于正相色譜柱,可先用正己烷等非極性溶劑沖洗,后用極性稍強的溶劑。
  清洗時間一般為色譜柱體積的3-5倍,以去除樣品殘留。
  再生色譜柱
  當色譜柱的性能下降,如出現峰形變寬、保留時間改變或柱壓升高等情況時,需要進行再生。
  再生方法因色譜柱類型而異。對于反相色譜柱,可嘗試用1-2M的NaOH溶液沖洗,然后用水和甲醇依次沖洗;對于正相色譜柱,可用適當的酸或堿溶液處理。再生后要充分水洗和平衡后再使用。
  儲存色譜柱
  如果長時間不使用色譜柱,要將色譜柱從儀器上取下,清洗干凈后,充滿合適的保存液(如甲醇或乙腈),兩端密封好,放置在陰涼干燥處保存。

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