1.污染

Q：以下圖片中的細胞是否已污染？這些小黑點，PBS沖洗能去掉大部分，但第二天會重新出現。

A：圖中的細胞存在微生物污染，在細胞與細胞間隙之間，有大量的小黑點聚集，且形狀基本上都是規則的顆粒狀。

當使用PBS沖洗時，能洗掉大部分，但卻無法全部清楚，因為只要殘留極少量的微生物，還是會繼續繁殖的。

從問題描述來看，PBS沖洗后第二天黑點就重新出現，憑這一點就可以輔助我們進行判斷——這是微生物污染。如果PBS沖洗后，黑點不再出現，那么黑點可能只是培養物碎片/雜質，但如果會不斷增加、無法全部清除，就肯定是污染。

有同學可能會疑惑，我不是在培養基中加了雙抗么，為什么還會污染呢？

雙抗，能抑制微生物增殖，但無法全部殺滅微生物。當污染達到一定程度后，雙抗也就無法繼續抑制它們的增殖，而隨后，你就能在顯微鏡下看到微生物污染了。此時，雙抗對微生物的影響已經失效。

對于上圖的細胞，我們只能扔棄，避免其波及其他培養瓶內的細胞。

相應的，這里也貼出一張正常狀態、沒有微生物污染的細胞，在視野內細胞與細胞的間隙是很干凈的，沒有黑點、桿狀、絲狀物，細胞也基本上是完好無損的，沒有解體的細胞。

2.傳代

Q：以下圖中的細胞狀態正常嗎？繼續培養還是消化傳代？

A：圖中的細胞密度已經達到了100%，細胞與細胞之間已經沒有任何空隙，所以我們看到這些細胞都擠成一堆了，它原本是什么形態的根本無法觀察出來。

當細胞的密度達到100%時，細胞就會與周圍的細胞全部貼合在一起，產生“接觸抑制”，表現為停止增殖，隨后就是細胞狀態開始下滑——進入衰退。

如果拿這個狀態的細胞去做實驗，效果會受到影響。大家要盡量避免細胞長得太密才進行消化傳代。以下是我們之前提供過的一張細胞密度示意圖。一般來說，80%-90%的密度就可以消化了。

3.復蘇

Q：以下圖中的細胞是復蘇后第二天的，細胞（貼壁生長的）還活著嗎？

A：復蘇后的細胞，如果是貼壁生長的，一般種入培養器皿后大約10-16小時就可以貼壁生長了。

解凍的過程也要盡快完成，可以嘗試拿一個塑料薄膜手套裝著凍存管，然后鑷子夾住管子和薄膜手套部分，深入水中不斷搖晃，觀察到管內已經全是液體后，立即停止并盡快進入下一步操作。

以上就是本期答疑帖的全部內容，如果需要PBS、雙抗溶液可以向我們咨詢，歡迎關注安培生物科技有限公司了解更多技術與產品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務