研究真核基因的zui基礎的工作之一就是確定其轉錄終止位點，目前zui通用的方 法是 5′-RACE 法，RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）是 Frohman 發明的、通過 PCR 快速克隆 cDNA 末端的技術，它在不建立 cDNA 文庫的前提下， 利用已知 cDNA 序列設計引物，通過往兩端延伸和擴增獲得其 5′-端序列。本試劑盒 就是根據 5′-RACE 原理而開發，
AB熒光桃紅染色法粘多糖染色試劑盒具有下列特點： 1. 即開即用，客戶不需要單獨準備各種材料。
2. 反應條件經過精心優化，包括使用無 RNase H 活性的 MMLV 和優化的引物。
AB熒光桃紅染色法粘多糖染色試劑盒的原理如下圖：

自備試劑：Poly(A) RNA（或總 RNA）、基因專一性引物 A、B、C、75%乙醇。
注意：自備的 基因專一性引物 A，B，C 的相對位置應該跟本手冊產品介紹中的示意圖*。 運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存、有效期一年。

5’RACE試劑盒使用方法
1. 變性模板 RNA：將 1 μg mRNA 或 5 μg 總 RNA 加入到一個 RNase-free 的 PCR 管中，補 RNase-Free 水到 9 μL，65℃保溫 5 分鐘后短暫離心，立即放 冰上待用。如果 RNA 濃度偏低，體積超過 9 μL,可以使用本公司的核酸濃縮劑 （需另購,產品編號為 110801-30）濃縮到所需的體積。
2. 設置 RT 反應（用戶可以根據需要設陰性對照）：在上步的含變性后的 RNA 模 板的 PCR 管中，按順序加入：
3. 37℃保溫 60 分鐘， 42℃保溫 30 分鐘， 50℃保溫 10 分鐘，zui后 75℃保溫 10 分鐘使逆轉錄酶變性。短暫離心 5 秒后待用。
4. 在 PCR 管中加入 40 μL 微量核酸沉淀劑（本產品含不溶的核酸助沉劑，用前 需要充分搖勻再取用），震蕩混勻。
5. 室溫12000 rpm離心15分鐘，小心吸棄上清。此步沉淀可以去除多余的dNTP。
6. 加入 1mL 自備 75%乙醇，室溫 12000 rpm 離心 5 分鐘，小心吸棄上清。
7. 短暫離心數秒，小心吸棄殘留液體后，稍微晾干后加入 20 μL RNase-free 水， 充分吹打溶解，得到 cDNA 溶液待用。注意：為保證加尾效率，溶解 cDNA 的 RNase-free 水zui不要超過 20 μL。
8. 在兩個塑料離心管中按下表設置加尾反應（強烈建議做一組加尾陰性對照管）
9. 37℃保溫 15 分鐘進行加尾反應，然后 75℃保溫 3 分鐘滅活末端轉移酶。 10. 分別加入 0.5 mL RNase-free 水稀釋樣品管和對照管中的加尾反應產物。此稀 釋液將作為 PCR 的模板。 11. *輪 PCR：按下表分別使用不同體積的樣品管稀釋液和對照管稀釋液做模板 設置 PCR 反應（單位：μL，下表只列出以樣品管稀釋液為模板的反應）。
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