兩管式RT-PCR試劑盒（MMLV-Taq）是整合 cDNA *鏈合成試劑和即用型 PCR 試劑而得的 RT-PCR 試劑盒。cDNA *鏈合成反應和 PCR 反應分別在兩個離心管中進行。

兩管式RT-PCR試劑盒（MMLV-Taq）具有下列特點：
1. 即開即用，足夠 50 次 RT 反應（20 uL 體系）和 600 次 PCR 反應（30 uL 體系）。
2. cDNA *鏈合成試劑盒可靈活選用隨機引物、Oligo dT 引物或基因專一引物，適合
各種情況。
3. PCR 試劑盒具有即用、簡單等優點，PCR mix 中含上樣染料，所以 PCR 產物可以直
接上樣電泳。
4. 兩管式操作，RT 和 PCR 在不同試管中進行，便于單獨優化 RT 反應或 PCR 反應條件。
5. 擴增效率高, zui長可擴增 5 Kbp 以上的 RNA。
規格及成分
成 分 編 號 50 次塑料袋包裝
RT 試劑盒（CAT#:60906） 60906 50 次
即用型PCR試劑盒3.0（CAT#:90805） 90805 9 mL
使用手冊 80206sc 1 份
RT 試劑盒（CAT#:60906）成分表：
RT 試劑盒成分 50 次包裝
MMLV 逆轉錄酶 (含 RI) 100 uL
RT Buffer（含 dNTP） 300 uL
Oligo (dT)18 引物(0.5ug/uL) 50 uL
隨機引物(0.2 ug/uL) 50 uL
RNase-free 水 10 mL
即用型 PCR 試劑盒 3.0（CAT#:90805）成分表：
即用型 PCR 試劑盒 3.0 成分 600 次包裝
PCR MagicMix 3.0 9 mL
染料 360 uL
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存, 有效期一年。
自備試劑 樣品 RNA、模板專一正向和反向引物。
使用方法 一、樣品 RNA 的制備（本試劑盒不提供相關試劑）
1、可用自本公司各種 RNA 提取方法提取樣品的 RNA，也可以選用其他供應商的產品，但
得到的 RNA 一定要溶解在 RNase-free 的超純水中。
二：RT（逆轉錄）反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系（20 uL 體系）:
RNA 模板
總 RNA 100-500 ng
或 poly(A) mRNA 10-500 ng
或專一的 RNA（如體外轉錄制備的） 0.01 pg-500 ng
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或自備模板專一反向引物(10 pmol/uL) 1-2 uL
RNase-free 水 補水到 12 uL
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。隨機引物與 RNA 模板的比例將決定
cDNA 合成的平均長度（成反比）。一般情況下隨機引物效率好于 OligodT 引物，但
如果只想轉錄總 RNA 中的 mRNA（只占 5%左右），則可優先選用 OligodT 引物，
這樣就可以排除非 mRNA 的干擾。
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 按順序加入 6 uL RT Buffer（含 dNTP）和 2 uLMMLV 逆轉錄酶（含 RI），反
應終體積為 20 uL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。
6. 合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，不需要純化。剩余樣品可以放置在
-20℃長期保存。
三、PCR（30 uL 體系）
1、將全部染料加入到 PCR MagicMix 3.0 中，輕柔顛倒混勻即可使用。未用完的部
分需要在-20℃。也可以不加染料，但在 PCR 結束后，電泳上樣前，則需要加入
電泳上樣液，否則電泳時沒法判斷電泳速度。
2、在 PCR 管中加入下列成分：
成分 加入量
PCR MagicMix 3.0（已加染料） 15 uL
cDNA 樣品（上步的 RT 反應液） 1-5 uL
模板專一性正向引物(10 pmol/uL) 1-2 uL
模板專一性反向引物(10 pmol/uL) 1-2 uL
補水到 30 uL
注意：cDNA 也可以稀釋后用作 PCR 模板。是否稀釋或稀釋多少倍*取決于靶基因
的豐度。
2、PCR 反應參數(需要根據模板和引物決定，下面的只做參考)：
過程 溫度 時間
預變性 94℃ 5 min
PCR 反應
（35 個循環）
94℃ 1 min
55℃ 1 min
72℃ 2 min
zui后延伸 72℃ 10 min
四、電泳檢測
1、取 5-0 uL PCR 產物直接在 PAGE 或瓊脂糖凝膠上電泳，跟分子量標準比較估計出擴
增產物的大小。注：本試劑盒中的 PCR mix 含有甘油和染料，可以直接上樣，不需要
額外再加電泳上樣液。
關聯產品 雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒（CAT#:91202-50）