TdT加尾法DNA生物素標記試劑盒（B）是基于 TdT 末端轉移酶能夠在 DNA 的 3’端添加 dNTP 尾巴的原理而設計，該反應的示意圖如下：

TdT加尾法DNA生物素標記試劑盒（B）是在上述原理的基礎上開發的，具有下列特點：
1. 快速，15 分鐘即可完成標記反應。
2. 不但可用于單鏈 DNA 和 DNA Oligo 標記，還可用于 3’突出的雙鏈
DNA 標記，但后者標記效率稍低。
3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和標記的核苷酸等）。
4. 提供不帶標記核苷酸、帶生物素標記核苷酸和帶標記核苷酸三種
選擇。
5. 同時提供非標記的 dATP，用戶可以用其調節加尾長短和標記核苷酸摻
入比例。
6. 標記的探針可用于電泳遷移率實驗（EMSA）、原位雜交（ISH）、Northern
Blot（不推薦用于低豐度 RNA 檢測）、小 RNA Northern、Southern Blot
（不推薦用于單拷貝基因檢測）、菌落雜交、斑點印跡雜交分析等。
規格及成分 成 份 編 號 5 次包裝
TdT 緩沖液，5× 20 uL
TdT（末端轉移酶，10 U/uL） 10 uL
dATP，2 mM 5 uL
標記核苷酸 （A、B、C 不同，見注）
超純水 100935 1 mL
使用手冊
90605s
c
1 份
注：A 型用于自選標記，用戶需自備標記
核苷酸，本產品不提供標記核苷酸；B 型
提供 5 uL Biotin-11-dUTP；C 型提供含
5 uL DIG-11-dUTP。

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年
自備試劑 DNA 模板
使用方法 1. 在 0.2 mL 微量離心管中按下表設置一個 20 uL 體系的標記反應（如果
需要標記更多探針，請增加標記體積而不要增加探針 DNA 的濃度）：
成份 用量
探針 DNA 100-200 pmol
TdT Buffer，5× 4 uL
標記核苷酸，1 mM
（A 型需自備標記核苷酸） 1 uL
dATP，2 mM （見下注）
TdT 末端轉移酶（10 U/uL） 2 uL
超純水 補到 20 uL
注: dATP 可以不加，但這樣得到的加尾全部是標記核
苷酸，由于空間阻礙，靈敏度不一定*。如果雜交
效果不好，摻入一定比例的 dATP 到標記核苷酸中，
以控制標記的密度，提高比活。具體比例如何可以自
己優化。
2. 37℃反應 15 分鐘，延長到 30 分鐘也可以。如果沒有非標記核苷酸存在，
一般可以加尾 3-5 個 Biotin 或 DIG 標記的核苷酸（標記物空間阻礙抑制
延長）；如果有在加尾反應中加入一定比例的非標記核苷酸 dATP（其他
dNTP 也可，只是本試劑盒只提供 dATP 而已），每條探針上可加上約 100
個核苷酸，平均含 5 個標記核苷酸
3. 70℃ 10 分鐘滅活 TdT 酶。
4. 如果需要，可以 PAGE 電泳+銀染（相關試劑需要另購）檢測標記效率，
帶標記的探針泳動速度將低于沒標記的探針。
5. 如果是非同位素標記，探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非
同位素標記的探針，請不要酚/氯抽提，因為非同位素標記物一般會使
探針 DNA 進入有機相而丟失。
6. 使用時需將探針以 1-8 ng/uL 的終濃度加入到雜交液中（如果探針是雙
鏈 DNA，加入前還需熱變性）。如果不立即使用，非同位素標記的探針
DNA 可-20℃長期放置一年，同位素標記的探針 DNA 不能放置。
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