大腸桿菌DH10Bac化學感受態細胞是大腸桿菌 BL21（DE3）plysS 菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA 的熱擊轉化。使用 pUC19 質粒檢測本產品，轉化效率可達 107。該菌株帶有質粒plysS，具有氯霉素抗性，此質粒含有表達 T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾 IPTG 誘導的表達

產品及特點

大腸桿菌DH10B化學感受態細胞是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態細胞，適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統中同源重組的菌株，用于產生重組 Bacmid。使用 pUC19 質粒檢測，
本產品轉化效率可達 107CFU/μg。
DH10Bac 細胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質粒 pMON7124。親本
Bacmid 包含一個 mini-F 復制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點和 lac Zα-互補因子。
輔助質粒包含 tns ABCD 區域，該區域提供了 mini-Tn7 從供體質粒插入親本 Bacmid 靶
位點所需要的轉座蛋白。供體如 pFastBac 系列質粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）
含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂，Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲病毒
多角體基因啟動子、多克隆位點和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號。當含有靶基因 pFastBac
的重組質粒轉化到 DH10Bac 細胞后，發生重組后就可產生重組 Bacmid，提取純化重組
Bacmid 轉染昆蟲細胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產生昆蟲病毒。此外，DH10Bac 細胞中的
The φ80dlacZDM15 基因的產物可以實現β-半乳糖苷酶的α-互補現象，用于重組 bacmid
的藍白斑篩選。

菌株基因型為：F
- mcrA Δ(mrr
-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1
endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-
rpsL nupG/pMON14272/pMON7124
規格及成分 成分 編號 包裝
本產品 140576 0.1 mL×10
使用手冊 1 份

運輸及保存 干冰運輸、-80℃保存，避免反復凍融，有效期半年。
自備試劑 重組質粒、SOC 或 LB 培養基等
大腸桿菌DH10B化學感受態細胞使用方法 1. 制備含 有如 下抗生 素的 LB 固 體平板 ：50 μ g/mL Kanamycin ，7 μ g/mL
gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為 50-100 μL，可以根據
實際情況分裝使用。
以下實驗以 100 μL 感受態細胞為例。
3. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入 1-10 ng 重組質粒，用移液器輕輕吹
打混勻，冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個離心管中加入 900 μL 無菌的 SOC（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 搖床，
200rpm 振蕩培養 4 小時。
6. 用 SOC 培養基進行 10 倍梯度稀釋，如分成 3 個稀釋梯度 10-1
,10-2
,10-3。
7. 取 100 μL 的各個梯度的培養物用于涂布。等平板中的液體*吸收后，倒置平板，
37℃培養 24-48 小時。
8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，視平板上菌落生長情況決定去留。
注意：
1. 涂布用量可根據具體實驗調整。
2. 新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再
涂布新培養基進行培養。