產(chǎn)品特點
種屬：小鼠
組織來源：乳腺組織
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
C2C12小鼠成肌細胞背景描述：4T1細胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。當4T1細胞注射到BALB/c小鼠中時，4T1細胞會自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺、肝、淋巴結(jié)和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶，誘導轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動物模型。4T1細胞誘導的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動力學相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細胞誘導的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比，由于4T1細胞的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細胞團(少到僅僅1個)也可以在許多遠端器官中檢測到，沒必要數(shù)淋巴結(jié)或稱重器官。
生長培養(yǎng)基：RPMI-1640(貨號:PM150110)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃

C2C12小鼠成肌細胞傳代方法：

實驗方法原理    培養(yǎng)細胞傳代根據(jù)不同細胞采取不同的方法。貼壁生長的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞用直接吹打可傳代；懸浮生長的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。
實驗材料    細胞
試劑、試劑盒    D-Hanks液小牛血清RPMI1640雙抗胰蛋白酶EDTANHClNaHCO3
儀器、耗材    凈化工作臺離心機恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡培養(yǎng)箱吸管玻璃瓶培養(yǎng)瓶廢液缸吸頭槍頭膠塞離心管量加樣槍 紅血球計數(shù)板
實驗步驟    
1.  貼壁細胞的消化法傳代：

（1）吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

（2）D-Hanks液洗2～3次。
 
（3）向瓶內(nèi)加入適量消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使消化液流遍所有細胞表面。

（4）然后吸掉或倒掉消化液后再加適量新的消化液，輕輕搖動再倒掉大部分消化液，僅留少許進行消化（也可不采用上述步驟直接加消化液進行消化）。
 
（5）消化在37℃或室溫25℃以上環(huán)境下進行。

（6）消化2～5 min 后把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進行觀察，發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大后，應(yīng)立即終止消化。
 
（7）吸除或倒掉消化液，如用EDTA消化，需加Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶把殘留消化液沖掉。

（8）再加培養(yǎng)液。如僅用胰蛋白酶可直接加少許含血清的培養(yǎng)液，終止消化。
 
（9）用彎頭吸管，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細胞，吹打過程要順序進行。

（10）從培養(yǎng)瓶底部一邊開始到另一邊結(jié)束，以確保所有底部都被吹到，使細胞脫離瓶壁后形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔不要用力過猛。 
 
（11） 計數(shù)，分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
 
2.  懸浮細胞的傳代：懸浮細胞傳代可離心收集細胞后傳代，或直接傳代。

離心傳代法：

（1） 將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到15 ml 離心管內(nèi)。
 
（2） 離心800~1000 rpm，5 min。
 
（3） 棄去上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打形成細胞懸液。
 
（4） 計數(shù)，分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
 
（5）直接傳代即讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清液吸掉1/2~2/3，然后用吸管吹打形成細胞懸液后再傳代。

3.  部分貼壁細胞的傳代

（1）部分貼壁不牢的細胞，如Hela細胞等，不經(jīng)消化處理直接吹打可使細胞從壁上脫落下來，而進行傳代。

（2）對絕大部分貼壁生長的細胞，因直接吹打?qū)毎麚p傷較大，細胞常有較大數(shù)量的丟失，因而需消化后，才能吹打傳代。
收起 
注意事項    
1.  胰蛋白酶要預(yù)溫，溫度37℃左右為宜℃。

2.  離心轉(zhuǎn)速要合適，轉(zhuǎn)速過低，不能有效分離細胞，離心速度過大，時間過長，會擠壓細胞造成損傷甚至死亡。

3.  要定時觀察細胞，發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)及時處理。