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當前位置:石家莊西默科技有限公司>>生物試劑>>WAKO>> 058-09261EV-Save™ 細胞外囊泡吸附抑制劑WAKO

EV-Save™ 細胞外囊泡吸附抑制劑WAKO

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產(chǎn)品型號058-09261

品       牌Wako/和光純藥

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地石家莊市

更新時間:2025-04-06 11:05:54瀏覽次數(shù):23次

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供貨周期 兩周 規(guī)格 外泌體流式試劑盒
貨號 058-09261
EV-Save™ 細胞外囊泡吸附抑制劑WAKO
減少實驗和保存時由于細胞外囊泡吸附而引起的損耗

EV-Save™ 細胞外囊泡吸附抑制劑WAKO

EV-Save™ 細胞外囊泡吸附抑制劑WAKO

各品牌都將脂質(zhì)、核酸或細胞膜的熒光標記試劑加以改造,使之成為包括外泌體在內(nèi)的細胞外囊泡的特異熒光標記試劑。該標記方法是讓從各個樣品中分離、提取出來的外泌體樣品與熒光色素進行反應,通過凝膠過濾或超濾裝置去除未反應的熒光色素。在該熒光標記的過程中,特別是去除未反應的熒光標記時,會因吸附而損失大量的外泌體樣品,同時,通過向外泌體樣品添加FUJIFILM Wako開發(fā)的EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent(下面簡稱EV-Save),能強烈抑制吸附損失(圖1)。用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS從COLO201細胞培養(yǎng)上清中分離、提取外泌體樣品,先用A公司的熒光標記試劑進行標記,然后用B公司的凝膠過濾柱去除未反應色素。將獲得的熒光標記外泌體樣品加入HeLa細胞培養(yǎng)上清中,經(jīng)過24小時的細胞吸收后,用熒光顯微鏡及流式細胞儀檢測。在熒光色素標記時預先向樣品中加入EV-Save,結果顯示,細胞內(nèi)的熒光信號比未添加EV-Save時大幅增強(圖1、A, B)。用PS Capture™ Exosome ELISA Kit后再比較凝膠過濾前后外泌體樣品的吸附損失, 未添加EV-Save的樣品在凝膠過濾后沒被檢測到外泌體表面標記物CD63的信號,而添加了EV-Save的樣品則檢測到了CD63的信號,所以,EV-Save能有效抑制凝膠過濾引起的吸附損失(圖1、C)。


EV-Save™ 細胞外囊泡吸附抑制劑WAKO

圖1.熒光標記外泌體樣品的吸收確認與EV-Save抑制吸附損失的效果

用A公司的熒光標記試劑對MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS分離的COLO201來源外泌體樣品(1 ×1010 particles)進行標記后,再用熒光顯微鏡(A)和流式細胞儀(B)確認HeLa細胞吸收外泌體樣品的情況。

準備同上的外泌體樣品(5 × 109 particles),可以用PS Capture™ Exosome ELISA Kit比較CD63信號來檢測凝膠過濾前后的損失(C)。

通過FUJIFILM Wako PS親和法和超離法從相同量的培養(yǎng)上清樣品中分離、提取出外泌體樣品,再用A公司的熒光標記試劑標記外泌體樣品,進行細胞吸收外泌體的確認實驗(圖3)。熒光顯微鏡的分析結果表明,受體細胞吸收的由超離法分離、提取出的外泌體樣品比PS親和提取的外泌體樣品更多(圖3、A)。但是,詳細分析提取外泌體樣品時,盡管蛋白濃度和粒子數(shù)分析顯示出超離樣品含有更多的外泌體量,但是如果用PS Capture™ Exosome ELISA Kit檢測外泌體標記物CD63信號,PS親和法分離、提取的樣品比用超離法分離、提取的外泌體樣品的一個粒子的CD63信號和純度更高(圖3、B)。使用雜質(zhì)多、污染嚴重的超離法制備外泌體樣品時,受體細胞吸收的信號實體不僅來源于外泌體,也可能來源于雜質(zhì)蛋白。

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